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随着人们消费习惯的改变,马铃薯块茎除鲜食外,其加工产品也越来越被消费者们接受,其中最主要的是油炸加工食品。在马铃薯加工产业中,为了延长货架期、减少常温储藏中的损失,往往采用低温环境储藏,但是低温储藏时会促进块茎中还原糖的积累导致低温糖化现象的发生,严重地影响马铃薯块茎油炸加工品质。本研究在实验室前期研究的基础上,进一步对转Sb RFP1基因株系的表型进行了分析,并探讨了Sb RFP1在马铃薯低温糖化中的作用机制,主要结果如下:1)通过对转基因株系及对照的重要农艺性状(株高、单株产量和单株结薯数等)、淀粉降解率、还原糖含量以及块茎油炸色泽等进行分析,结果表明调节该基因的表达能明显控制马铃薯块茎的低温糖化现象,改良马铃薯加工色泽,且对株高、单株产量等没有明显影响,说明该基因在改善马铃薯加工品质中具有较好的应用价值。2)完成了Sb RFP1及其突变体Sb RFP1(H-T/C-S)、St Amy23、St BAM1等蛋白的体外表达。测定Sb RFP1及其突变体的泛素连接酶活性,结果表明Sb RFP1具有泛素连接酶活性,突变RING finger结构域后的Sb RFP1(H-T/C-S)不具备泛素连接酶的活性。3)利用Pull-down技术,分析了Sb RFP1与St Amy23、St BAM1、Stvac INV1等蛋白间互作关系,结果表明Sb RFP1能与St Amy23、St BAM1互作;进一步的体外添加活性分析表明,Sb RFP1能在体外影响淀粉酶特别是β-淀粉酶的活性。此外,通过ELISA分析表明在转基因株系及非转基因对照中其β-淀粉酶的含量没有明显差异。以上结果表明,Sb RFP1能够与St Amy23、St BAM1等互作,影响淀粉酶的活性,特别是β-淀粉酶的活性,从而影响低温下块茎中还原糖的积累,而且这种作用方式很有可能不是通过泛素化降解淀粉酶的方式实现的,而是通过非降解途径或改变淀粉酶的构象等方式影响淀粉酶的活性,以达到改善马铃薯油炸加工品质的效果。