棉花是一种重要的纤维作物和油料作物，棉纤维是已知纤维素纯度最高的天然资源。随着人们生活水平的日益提高和纺织工业的飞速发展，彩色棉花作为纯天然无污染的绿色产品在当今倍受青睐。但彩色棉花一直存在着纤维短、强度差、色谱狭窄及遗传性状不稳定等诸多问题使彩棉的发展滞缓。基因工程的兴起及其在作物产量提高及品质改良上发挥的巨大作用表明，利用基因工程手段来改善棉花的纤维品质是一条可行的途径。棉纤维发育相关基因和调控元件的识别与分离为这条途径提供了前提。目前世界各国对此研究领域都极为重视。可以预见彩色棉花纤维品质改良的基因工程前景十分美好。而基因工程进行的成功与否在很大程度上依赖于高效的转化体系的建立。很多制约组培工作顺利进展的因素是实验中必须研究与克服的关键。 本实验以绿色棉花9903、9803、9804为主要转化受体品种，采用农杆菌介导的载体法将Expansin基因转化棉花茎尖外植体。通过对影响组培和转化的相关因素的优化筛选，建立起适宜彩色棉花茎尖转化的高效体系，希望为彩色棉花纤维品质的分子改良工程提供良好的转基因受体系统和适宜的转化方法。其研究结果如下： 1．PCR检测结果表明，质粒PBinEXN成功转入根癌农杆菌EHA105中，可以作为载体用于植物转化。 2．用棉花品种晋25、蘅无8930、抗03、新扩8号为材料，以MS为基本培养基，附加不同浓度的激素KT进行培养，结果表明，棉花茎尖体系诱导成苗率与基因型没有差异，均以MS+0.1mg／L KT为最适培养基。茎尖成苗途径不经过愈伤的诱导与分化，成苗快，周期短，不受基因型限制，是较好的植株再生体系。茎尖体系用做转化时，三个月左右可以得到3-4cm的小植株。还具有成苗率高，再生苗无畸形苗出现等优点，是良好的转化受体系统。 3．以绿9901，绿9804，绿9903，晋25，衡无8930为供试材料，进行Kan的敏感测试。结果表明，筛选压力存在基因型的差异，绿色棉花比白色棉花对Kan更敏感，在Kan浓度为70mg／L时，达到100％的白化率，可作为绿色棉花转化筛选的最高选择压。 4．侵染用的农杆菌的浓度对转化有很大影响。以绿9901，绿9803，绿9804，晋25，衡无8930为供试材料，测试不同浓度的菌液侵染后所得抗性绿苗率的差异。结果表明，摘要菌液浓度高效的侵染范围在OD600为0.5一0.7之间，OD60。为0.5时不同品种的总体抗性苗率普遍较高。同样条件下，绿色棉花的抗性绿苗率要高于白色棉花，鉴于绿色棉花对抗生素更敏感，认为绿色棉花可能比白色棉花更易于进行遗传转化。 5.外植体的生理状态直接关系到茎尖的成苗率。以绿9803，绿9804，绿9903，晋25为供试材料，测试不同苗龄的茎尖外植体侵染后所得抗性绿苗率的差异。结果表明，不同苗龄的棉花茎尖用作转化，不存在基因型限制，均以3d苗龄的茎尖转化后，抗性绿苗率最高，以后随着苗龄的增加抗性绿苗率显著降低。 6.以绿棉9804为供试材料，研究真空渗透处理对转化的影响，表明真空处理不但可以很好的抑制假阳性的发生，而月.能够提高转化中的抗性苗率。进一步的方差分析表明，在棉花转化过程中 再保持smin的效果最好， 大伤害。真空渗透处理存在时间上的差异，抽真空到液面出现气泡后， 所得平均抗性绿苗率最高。过度的负压处理会对细胞造成很7.抗性苗的壮苗生根培养与培养基的成分密切相关。研究中发现，在抗性苗的筛选培养基中添加活性炭与现壮苗。KT交替使用，可以抑制酚类物质对抗性苗的毒害作用，从而实 本研究首次采用农杆菌真空渗透法将Expansin基因转化彩色棉茎尖受体，建立起彩色棉花茎尖转化的高效体系，证明茎尖是良好的转化受体系统。本研究可为其他研究者提供参考。