【摘 要】
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目的:明确热休克转录因子1（HSF1）在急性肺损伤（ALI）中对NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）表达的调控以及对肺泡巨噬细胞（AMs）的影响。方法:1.HSF1在大鼠ALI模型中的表达差异对SD大鼠进行实验分组:（1）Control组:生理盐水处理;（2）LPS组:LPS处理。应用血气分析计算氧合指数（Pa O2/Fi O2）;计算大鼠肺组织湿/干（W/D）比、苏木精-伊红（HE）
【基金项目】
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贵州省科学技术厅（黔科合基础【2020】1Z061）oXiris肠淋巴液净化通过靶向DAMPs在肠IRI致ARDS大鼠模型的保护机制研究; 贵州省委科学技术基金【gzwkj2021-038】HSF1/β-catenin调控NLRP3炎性小体激活保护脓毒症急性肺损伤的机制研究
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目的:明确热休克转录因子1（HSF1）在急性肺损伤（ALI）中对NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）表达的调控以及对肺泡巨噬细胞（AMs）的影响。方法:1.HSF1在大鼠ALI模型中的表达差异对SD大鼠进行实验分组:（1）Control组:生理盐水处理;（2）LPS组:LPS处理。应用血气分析计算氧合指数（Pa O2/Fi O2）;计算大鼠肺组织湿/干（W/D）比、苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织结构,作出ALI评分;实时定量PCR（q RT-PCR）、Western Blot检测肺组织中HSF1、β-catenin、NLRP3表达水平。2.HSF1对ALI体内模型的影响对SD大鼠进行实验分组:（1）Control:生理盐水处理组;（2）LPS组:LPS处理;（3）Empty+LPS组:空载腺病毒+LPS处理;（4）HSF1+LPS组:过表达HSF1腺病毒+LPS处理。血气分析获取大鼠Pa O2/Fi O2;计算肺W/D比;HE染色观测肺部结构;TUNEL法观测肺部凋亡;免疫组织化学染色检测肺组织中CD68表达;q RT-PCR和Western Blot检测肺部HSF1、β-catenin、NLRP3表达情况;酶联免疫吸附剂实验（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、IL-1β、IL-18的含量。3.HSF1对ALI体外模型的影响提取原代大鼠AMs,应用瑞氏-姬姆萨染色鉴定,流式细胞术测AMs（CD68）纯度,台盼蓝染色测AMs存活率。实验分组:（1）Control:正常培养;（2）LPS组:LPS处理;（3）Empty+LPS组:空载质粒+LPS处理;（4）HSF1+LPS组:过表达HSF1质粒+LPS处理。24 h后,CCK-8测AMs活力、流式细胞术测AMs凋亡,以及AMs中CD86、CD206阳性表达;q RT-PCR和Western Blot检测AMs中HSF1、β-catenin、NLRP3表达;ELISA检测AMs培养液中TNF-α、IL-1β、IL-18水平。结果:1.HSF1减轻LPS诱导的大鼠ALI与Control组比较,LPS组和Empty vector+LPS组的HE染色显示肺部破坏增多、ALI评分增高、肺W/D比增加、Pa O2/Fi O2降低、TUNEL染色凋亡细胞增多、免疫组织化学染色显示肺部巨噬细胞浸润增加。与LPS组、Empty vector+LPS组比较,HSF1+LPS组肺组织破坏减少、ALI评分降低、肺W/D比减小、Pa O2/Fi O2上升、TUNEL染色显示凋亡细胞减少、免疫组织化学染色证实肺组织巨噬细胞浸润减少（均P＜0.05）。2.HSF1减轻LPS对AMs的损伤与Control组比较,LPS组和Empty vector+LPS组AMs凋亡率增加、细胞活力下降,AMs向M1型极化增加。与LPS组、Empty vector+LPS组比较,HSF1+LPS组AMs的凋亡率降低、细胞活力上升,AMs向M1型极化减少,向M2型极化增多（均P＜0.05）。3.HSF1下调ALI中NLRP3的表达体内外实验均显示:与Control组比较,LPS组和Empty vector+LPS组的HSF1、β-catenin表达降低,NLRP3表达增高。与LPS组、Empty vector+LPS组比较,HSF1+LPS组中HSF1、β-catenin表达增加,NLRP3表达降低（均P＜0.05）。结论:HSF1对LPS诱导的ALI具有保护作用,其机制可能与下调NLRP3表达,以及减少AMs向M1型极化有关。
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