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1.NLK在TNFα诱导的NF-κB信号转导中的作用转录因子NF-κB广泛存在于各种细胞中,它调节了细胞的应激反应,炎症应答相关基因的转录。它的失调会引起许多疾病,如类风湿性关节炎,因此严格调控NF-κB的激活对于细胞维持压力应答和炎症稳态非常重要。近年来尽管不断揭示NF-κB激活的机制,然而在TNFα诱导的NF-κB信号转导中,IKKβ激酶活性失活的机制还不清楚。在这里我们报道了NLK通过抑制IKKβ的磷酸化负调节了TNFα诱导的NF-κB信号转导。过表达NLK极大的降低了TNFα诱导的NF-κB的激活,IκBα的降解和p65的细胞核转位;然而NLK缺失却导致了相反的结果。从机制上来说,我们确定了NLK和IKK复合物相互作用,该相互作用抑制了TAK1/IKKβ复合物的组装,并且减少了IκB激酶的磷酸化。我们的结果表明NLK可以干扰TAK1和IKKβ的相互作用,导致蛋白激酶IKKβ失活,最终负调节TNFα诱导的NF-κB激活,这促进了对NF-κB失活机制的理解。2.NLK在细胞抗病毒应答中的作用RLR能够检测细胞质中病毒RNA并且激活线粒体抗病毒接头蛋白MAVS和TRAF3,从而导致Ⅰ型干扰素的快速产生并起始天然免疫抗病毒应答。尽管TRAF3对于细胞的抗病毒应答非常重要,但是对于调节它的分子机制到目前还知之甚少。我们的研究结果表明NLK通过调节TRAF3的泛素化抑制了病毒诱导的IFN-β产生和抗病毒免疫应答。过表达NLK抑制了病毒诱导的IFN-β启动子激活和抗病毒细胞因子的产生；而NLK缺失则促进了抗病毒细胞因子的产生从而抑制了病毒对细胞的感染,这些现象在引入NLK之后很大程度上得到恢复。进一步研究发现NLK能与TRAF3相互作用并且磷酸化TRAF3,磷酸化的TRAF3可以抑制它的泛素化和随后的TBK1和IRF3激活。持续性磷酸化的TRAF3突变体也有类似的效果,它能够抑制病毒诱导的IFN-β启动子的激活,TRAF3K63连接的泛素化和IFN-β的产生。这些发现揭示了NLK蛋白的新功能,它通过调节TRAF3的泛素化参与了Ⅰ型干扰素信号转导,这对于进一步了解NLK的功能和理解TRAF3在细胞抗病毒应答中的调节机制起着很重要的作用。3.NLK在大肠癌发生中的作用研究在真核生物中,细胞周期检验点对于细胞周期循环,细胞增殖和肿瘤发生具有很重要的作用。在这里,我们报道了NLK作为一个重要的癌基因参与大肠癌形成。使用同源重组方法在HCT116细胞中敲除NLK,通过集落形成,生长曲线,软琼脂和裸鼠异种移植实验分析该细胞,结果表明不论在体内还是体外NLK缺失都极大的抑制了肿瘤形成。在NLK缺失的细胞中,我们发现了明显的细胞周期的改变,NLK的缺失会增加G1期细胞比例并且G2/M期的比例会相应减少。缺少NLK的细胞,cyclinD3的蛋白水平明显减少,而且Rb蛋白磷酸化水平也有非常明显降低。HDACl和Rb通过形成一个复合物来控制G1/S细胞周期检验点,而NLK能够和HDACl相互作用,这说明NLK可能调节了这个复合物来调节细胞周期。这些结果都说明了NLK可能通过影响Rb复合物和cyclinD3的蛋白水平来控制G1/S细胞周期检验点,从而调节细胞周期循环进程。总的来说这些结果表明了NLK是一个有前景的大肠癌药物靶标。