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背景:肺癌是最主要的全球性公共健康问题之一。研究发现表皮生长因子受体(EGFR)突变在亚裔肺腺癌中占55%,且其中75%患者对EGFR酪氨酸蛋白激酶抑制剂(EGFR-TKIs)单药治疗有效。虽然EGFR-TKIs能显著改善晚期NSCLC患者总生存期和无进展生存期,但耐药现象一直困扰着TKI的临床应用。新的治疗标志物或新耐药机理的发现,有助于人们进一步认识NSCLC的异质性,产生克服耐药的新的治疗方案,以提高NSCLC患者的生存期。因此,新的标志物的发现具有重大的临床意义及社会意义。非整倍性和染色体不稳定性可以产生具有肿瘤特性的克隆,加重了肿瘤的异质性,促进了肿瘤的耐药和复发。极光激酶(Aurora kinase)家族成员在有丝分裂的进入、纺锤体组装和胞质分裂中起着关键作用,与染色体非整倍性和不稳定性关系极为密切。因针对Aurk A,Aurk B的临床药物的研究遭受挫折,而癌基因AurkC仅表达于睾丸组织及肿瘤组织,不表达于其他组织,因此,AurkC是较为理想的药物治疗靶标。目的:1、明确AurkC是否为EGFR-TKI耐药的新的诊断及治疗的标志物;2、探讨AurkC的表达调控机制及肿瘤耐药相关信号通路;3、中药单体库筛选AurkC的抑制剂山萘苷并验证其对TKI耐药NSCLC的治疗效果。方法:1、128例EGFR基因激活突变的NSCLC患者癌组织与140例癌旁组织临床标本制作成组织芯片(TMA),免疫组织化学方法(IHC)检测MET和AurkC的表达;采用Kaplan-Meier法分析患者的生存期与AurkC表达水平之间的相关性,采用皮尔森相关性(Pearson’s Correlation Coefficient)分析AurkC与MET的相关性。2、采用Western Blot技术检测吉非替尼敏感株HCC827和耐药株HCC827GR中AurkC、MET等分子的表达。3、采用基因沉默、基因敲除、抑制剂和过表达等方法改变吉非替尼敏感和耐药细胞株中AurkC、MET的表达和活性,Western Blot方法检测凋亡相关分子(Cleaved-PARP)、细胞周期相关分子(Cyclin B1、P27)以及AurkC、MET已知信号通路关键分子的变化;TMT标记的磷酸化定量蛋白质组学技术鉴定AurkC未知的调控分子;MTT法和软琼脂克隆形成实验(soft agar)检测细胞增殖与锚定非依赖生长能力;流式细胞术分析非整倍性染色体的细胞比例、细胞凋亡和细胞周期。4、采用分子对接实验、Kinase profiler靶标筛选技术、体外激酶实验和体内药物结合实验,确定山萘苷结合并抑制AurkC的活性。5、山萘苷、吉非替尼单独或联合处理吉非替尼耐药细胞,采用MTT和soft agar的方法,检测其细胞存活率和锚定非依赖生长能力;Western Blot的方法检测凋亡相关分子(Cleaved-PARP)的表达水平;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期。6、采用NOD-Prkdcscid Il2rgnull(NPSG)小鼠建立肺癌耐药皮下移植瘤动物模型,单用或联用山萘苷和吉非替尼,观察肿瘤生长情况,监测小鼠体重及肿瘤体积。结果:1、AurkC在吉非替尼耐药株、EGFR激活突变的NSCLC患者标本中高表达且与预后负相关。2、AurkC与MET的表达呈相关性,但敲除AurkC或MET,互不影响对方的蛋白表达。3、敲除AurkC或抑制其活性可抑制HCC827GR细胞的增殖、锚定非依赖生长能力,促进NSCLC细胞的G2期细胞周期阻滞及细胞凋亡;而过表达AurkC可以促进HCC827细胞的增殖和锚定非依赖生长能力及增加非整倍性染色体细胞比例。4、在AurkC敲除细胞中发现多种蛋白激酶,如周期相关蛋白(CDK13(S413))、MAPK信号通路相关分子(MAP2K4(S80)、MAPK4K5(S336)、ERK1/2(Y204/Y187))、转录因子(RREB-1(S1475/S42/S1653/S175/S1575)、HOXA3(S184))的磷酸化修饰水平降低,且发现许多新的磷酸化位点如MET(S996/S1236/S1020)、EGFR(S1104)。5、山萘苷抑制高表达AurkC的HCC827GR细胞增殖及锚定非依赖生长能力。6、山萘苷能与AurkC结合,并在体外和细胞内抑制AurkC的活性。7、山萘苷和吉非替尼联用抑制HCC827GR细胞增殖及锚定非依赖生长能力,抑制HCC827GR细胞皮下成瘤生长。结论:1、AurkC是NSCLC对吉非替尼耐药潜在的治疗靶标。2、AurkC引起的耐药与MAPK、细胞周期、细胞乙酰化相关蛋白调控等信号通路有关。3、山萘苷是AurkC的抑制剂,与吉非替尼联合用药,可以克服NSCLC对吉非替尼的耐药。