【摘 要】
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凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）是当前我国主要的养殖虾类之一。在高密度养殖条件下,养殖中后期常面临氨氮和亚硝基氮浓度较高的问题,影响凡纳滨对虾的生长和存活。本研究从生长性能、氨代谢酶、抗氧化酶活性、肝胰腺细胞凋亡情况探究了凡纳滨对虾对氨和亚硝酸盐胁迫的响应。1、氨亚急性胁迫对凡纳滨对虾生长、氨代谢、抗氧化和细胞凋亡相关指标的影响以氨氮浓度0.02mg/L的水体为基础水和对照（
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凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）是当前我国主要的养殖虾类之一。在高密度养殖条件下,养殖中后期常面临氨氮和亚硝基氮浓度较高的问题,影响凡纳滨对虾的生长和存活。本研究从生长性能、氨代谢酶、抗氧化酶活性、肝胰腺细胞凋亡情况探究了凡纳滨对虾对氨和亚硝酸盐胁迫的响应。1、氨亚急性胁迫对凡纳滨对虾生长、氨代谢、抗氧化和细胞凋亡相关指标的影响以氨氮浓度0.02mg/L的水体为基础水和对照（CA）,按0.9mg/L（S1）、5.2mg/L（S2）、12mg/L（S3）设定浓度在100L试验水体中分别添加9ml、52ml、120ml的10g/L母液,设置成3个氨氮胁迫处理组。将凡纳滨对虾分别置于各氨氮浓度组胁迫40d,并于20d、40d进行对虾组织样品采集。分析结果发现,胁迫处理20d时,随着设定氨氮浓度增加,对虾体质量增长率和存活率逐步降低,血淋巴中氨氮和尿素氮含量升高,肝胰腺中谷氨酸脱氢酶（GDH）、谷氨酰胺合成酶（GS）和过氧化氢酶（CAT）活性及肝胰腺中细胞色素C（cyt c）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase 3）基因相对表达量呈升高趋势;胁迫处理40d时,S2和S3组肝胰腺中GS、T-SOD、CAT酶活性显著低于CA组（P＜0.05）,肝胰腺cyt c和caspase 3基因相对表达量显著高于CA组（P＜0.05）。TUNEL检测结果显示,肝胰腺细胞凋亡数量随氨氮胁迫时间和浓度增加而增加。试验结果表明氨亚急性胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺氨代谢和抗氧化系统产生不利影响,诱导肝胰腺细胞发生凋亡,对肝胰腺造成一定损伤。2、解除氨亚急性胁迫后凡纳滨对虾氨代谢、抗氧化和细胞凋亡相关指标变化状况同样以氨氮浓度0.02mg/L的水体为基础水和对照（CA’）,按0.9mg/L（S1’）、5.2mg/L（S2’）、12mg/L（S3’）设定浓度在100L试验水体中分别添加9ml、52ml、120ml的10g/L母液,设置成3个氨氮胁迫处理组。将凡纳滨对虾分别置于各氨氮浓度组胁迫10d,于解除胁迫后0h、1h、6h和12h进行组织样品采集分析酶活和相关基因表达量。发现解除胁迫0h时,血淋巴氨氮、尿素氮含量随处理浓度的增加而升高,肝胰腺GDH、GS、T-SOD、CAT、总抗氧化能力（T-AOC）活性在S1组中显著高于CA’组（P＜0.05）,肝胰腺cyt c、caspase 3基因相对表达量在胁迫处理组中显著高于CA’组（P＜0.05）。解除胁迫6h时,S1’组对虾血淋巴氨氮、尿素氮含量和肝胰腺cyt c、capase 3基因相对表达量与CA’组无显著差异（P＞0.05）,12h时肝胰腺GDH和GS活性与CA’组无显著差异（P＞0.05）;解除胁迫12h时,S3组血淋巴氨氮含量和肝胰腺GDH和GS活性与CA’组无显著差异（P＞0.05）,而血淋巴尿素氮含量和肝胰腺T-SOD、CAT酶活性及肝胰腺cyt c、caspase 3基因相对表达量显著高于CA’组（P＜0.05）。综上,最高设定浓度的氨氮亚急性胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺氨代谢、抗氧化系统和细胞凋亡产生一定影响,解除胁迫后12h内无法使其恢复到正常水平。3、解除亚硝酸盐亚急性胁迫后凡纳滨对虾免疫、抗氧化和细胞凋亡相关指标的变化状况以亚硝基氮浓度0.02mg/L的水体为基础水和对照（CN）,按0.5mg/L（SN1）、1.4mg/L（SN2）和4mg/L（SN3）设定浓度在100L试验水体中分别添加5ml、14ml、40ml的10g/L母液,设置3个亚硝基氮胁迫处理组。将凡纳滨对虾分别置于各亚硝基氮浓度组胁迫10d,于解除胁迫后0h、1h、6h和12h进行组织样品采集分析酶活和相关基因表达量。解除胁迫0h时,血淋巴亚硝基氮含量和肝胰腺cyt c、caspase 3基因相对表达量随试验浓度的增加而升高,肝胰腺酸性磷酸酶（ACP）和碱性磷酸酶（AKP）活性随试验浓度的增加而降低,肝胰腺T-SOD、CAT、T-AOC酶活性在SN1、SN2组显著高于CN组（P＜0.05）。解除胁迫6h时,各胁迫组血淋巴亚硝基氮含量与CN组无显著差异（P＞0.05）,SN1组肝胰腺中ACP、AKP和肝胰腺cyt c基因相对表达量与CN组无显著差异（P＞0.05）;解除胁迫12h时,SN1组对虾肝胰腺中T-SOD、CAT、T-AOC酶活性与C组无显著差异（P＞0.05）,SN2组肝胰腺ACP、AKP、CAT和肝胰腺caspase 3基因相对表达量与CN组也无显著差异（P＞0.05）。综上,当亚硝基氮浓度高于SN2时,亚硝酸盐亚急性胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺免疫、抗氧化系统和细胞凋亡产生一定影响,12h的解除胁迫时间无法使对虾恢复到正常水平。
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