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肺癌是当今世界对人类健康危害最大的恶性肿瘤之一。其发病率和死亡率不仅在逐年上升而且在许多发达国家以及我国部分城市已跃居恶性肿瘤之首,如何降低肺癌的发病率和死亡率成为公共卫生和临床医学必须解决的一个重大问题。肺癌是遗传因素和环境因素共同作用所致的一种多基因复杂疾病。各种研究表明,热休克蛋白90(heat shock protein 90, Hsp90)通过影响肿瘤细胞的凋亡和增殖,调节细胞周期和细胞信号转导的功能在肺癌的发生和发展的过程中起着非常重要的作用。人类的Hsp90这种分子伴侣蛋白是由两种独立的基因编码产物组成的,Hsp90α和Hsp90β。Hsp90α是一种细胞质蛋白质,在生物进化过程中高度保守。肿瘤细胞中Hsp90α的表达明显比正常细胞高,在病毒转化和化学诱导的肿瘤中看到Hsp90α有明显的上升趋势。依赖于细胞状态和细胞的转化功能,Hsp90α能促进癌细胞的存活。而且,Hsp90α还能促进肿瘤的迁移和增殖以及和癌症的不良预后密切相关。蛋白质由基因编码,hsp90基因的改变可能引起Hsp90性质和表达量的变化,从而参与肺癌的发生发展,但目前还没有hsp90基因多态性与肺癌关系的研究。鉴于Hsp90α在肿瘤细胞中的表达增高以及Hsp90的抗凋亡反应在肺癌的发病及进程中的作用,编码Hsp90α的基因HSP90AA1的SNP_s可能与肺癌发病有一定联系。不同人种SNP_s类型和频率不同,NCBI数据库中有40个HSP90AA1 SNP_s,多数SNP_s缺乏人种及频率数据。在中国汉族人群中进行HSP90AA1 SNP_s与肺癌的关联研究必须首先明确HSP90AA1 SNP_s在中国汉族人群中的种类、频率和分布规律。因此,本课题运用分片段扩增直接测序的方法,结合Taqman基因分型技术检测HSP90AA1基因多态性,揭示了中国汉族人群HSP90AA1基因多态性分布规律;并采用病例-对照研究探讨了HSP90AA1基因多态性在肺癌发生发展中的关联和意义。第一部分HSP90AA1基因多态性在中国汉族人群中的分布本部分采用分片段扩增直接测序的方法检测30名健康志愿者的HSP90AA1基因的5’侧翼区、全部编码区及外显子与内含子交界区,从而揭示HSP90AA1基因多态性在中国汉族人群中的频率分布规律。结果显示:1.在HSP90AA1基因中共发现10个频率大于1%的SNP_s,其中3个为新发现SNP_s。3个新SNP_s均位于启动子区,最小等位基因频率分别为0.2、0.1、0.15。7个已报道的SNP_s为rs8005905(t/a)、rs10873531(t/c)、rs4947(c/t)、rs3742429(t/c)、rs2298877(a/g)、rs2298878(c/t)、rs35997255(_/tg)。2.将测得的SNP_s频率与NCBI数据库中的已知信息比较后发现中国人HSP90AA1 SNP_s频率与日本人近似,与欧美和非洲人差异显著,而且位于内含子的rs4947和位于3’端非翻译区的rs35997255均只有欧洲人群和非洲人群的信息而无中国和日本人群的信息。3.连锁不平衡分析后发现:rs4947和rs3742429,rs2298877和rs35997255之间为完全连锁不平衡(D′=1, r~2=1),其余位点之间存在很强的连锁(D′>0.9, r~2>0.9),且6个位点处于一个单倍域。4.通过软件计算结果发现,rs8005905可作为tagSNP,代表整个HSP90AA1基因的遗传变异信息。第二部分HSP90AA1基因多态性与肺癌的关联本部分采用病例-对照研究,应用Taqman基因分型法研究HSP90AA1基因rs8005905位点在2个中国汉族人群中(上海人群:521名病例和467名对照;武汉人群:1152名病例和1152名对照)和的分布情况及它们在肺癌中作用。结果显示:HSP90AA1基因rs8005905这个位点的基因型频率和等位基因频率分布在2个人群的病例组和对照组中差异无显著性(P>0.05)。再分别按病理类型、性别、年龄(以60岁划分)、吸烟状态、累计吸烟剂量(包年)进行分层分析,采用多元logistic回归分析对两组间年龄、性别、吸烟状况、累计吸烟剂量等因素进行校正后,在2个人群中均未观察到病例组和对照组的基因型频率分布和肺癌患病风险间的统计学意义。对武汉人群采用Cox回归分析,校正了年龄、性别、吸烟、病理分型、TNM分期、手术史、化疗和放疗的影响后,HSP90AA1基因r_s8005905多态性对肺癌患者预后的影响也无统计学意义(P>0.05)。说明r_s8005905多态性与上海地区,武汉地区的肺癌无关联。本研究的创新之处在于:(1)对中国汉族人群HSP90AA1基因进行了再测序,发现了3个新SNP_s,揭示了中国汉族人群h_sp90αSNP_s间的连锁关系,找出了h_sp90α基因有代表性的SNP_s,以及h_sp90α基因在中国汉族人群中的主要单倍型;(2)首次进行了h_sp90α基因SNP_s与肺癌关联的研究,并在2个不同人群中验证。本研究的不足和有待深入的地方:(1)可再加大样本量或是在别的人群中研究h_sp90α基因SNP_s与肺癌的关联性。(2)如前所诉, H_sp90由两种独立的基因编码产物组成,本次研究只做了作用比较广泛的h_sp90α基因的多态性研究, h_sp90β基因在肺癌发病中的关联还有待进一步研究。