脓毒症多发生于创伤、手术等严重感染后,是一种全身性的炎症反应综合征,主要表现为血流动力学障碍、组织灌注不足,最终导致多脏器衰竭,是临床上发病率、死亡率相当高疾病,现在仍缺乏有效的治疗手段。脓毒症主要表现为两个阶段:过度炎症期和免疫麻痹期。过度炎症期主要表现为TNF-α、IL-1β等炎性因子大量表达释放,导致血管渗漏及多脏器衰竭。免疫麻痹期主要表现为迟发超敏反应丧失、病原体清除能力下降以及继发性感染。越来越多的研究表明,免疫麻痹是脓毒症患者死亡的重要原因。单核细胞抗原提呈能力降低是免疫麻痹主要病理特征,表现为细胞膜HLA-DR的表达水平下降,临床上将单核细胞表面HLA-DR表达低于30%（相对于正常人）作为免疫麻痹的指标。因此,提高单核细胞表面HLA-DR的表达成为治疗脓毒症免疫抑制的重要干预手段。在我们前期研究工作中发现,强心甾类化合物如哇巴因能在细胞与整体动物水平逆转脓毒症免疫麻痹,这是首次发现的小分子化合物。通过机理分析,哇巴因能在转录后水平实现对多种TH1细胞因子mRNA表达的重新编程,结果发表于2014年EMBO MolMed。进一步研究发现,哇巴因作用不仅与稳定TH1细胞因子mRNA相关,也能激活人单核细胞表面HLA-DR的表达,但是其中的机制尚不清楚。哇巴因是一种内外源兼具的活性物质,但人们对它药理活性的认识—直限于心血管系统疾病中。1968年,Quastel等人发现哇巴因能抑制PMA诱导的T淋巴细胞增殖,揭开了哇巴因在免疫领域研究的序幕。现在,哇巴因作为一种激素样免疫调节因子在不同生理病理条件下发挥作用。HLA-DR是由人类白细胞抗原复合体编码的一种二型主要组织相容性抗原,主要在单核细胞、树突状细胞、B淋巴细胞等抗原提呈细胞表面表达。在免疫应答过程中HLA-DR将抗原肽呈递给CD4+T细胞,TNF-α IL-6等炎性因子被大量释放出来,从而抵抗外源微生物的入侵。单核细胞抗原提成能力主要通过细胞表面HLA-DR的表达水平来体现,所以HLA-DR的表达水平对于人体维持正常的免疫反应至关重要。本研究发现,50nM哇巴因单独处理人单核细胞THP1后HLA-DRα/β mRNA水平明显升高;50nM哇巴因和1μ g/ml LPS共处理THP1与1μg/ml LPS单独处理组相比,HLA-DR mRNA水平和蛋白水平均有所提高,表明哇巴因能逆转LPS诱导的HLA-DR表达降低。CIITA（MHC class Ⅱ transactivator）是 MHC class Ⅱ的核心调控因子,人体中CIITA有3个不同的启动子pⅠ,pⅢ和pⅣ。本研究发现,哇巴因能促进CIITA4 mRNA的表达,能逆转LPS诱导的CIITA4表达降低,哇巴因能诱导THP1产生微量IFNγ,哇巴因和IFNγ在促进CIITA4 mRNA表达上具有协同作用,尤其是在二次打击模型中哇巴因能刺激人单核细胞产生大量IFNγ。鉴于IRF1和STAT1在激活CIITA4 mRNA表达过程中起重要作用,本文发现干扰IRF1表达降低哇巴因对CIITA4 mRNA与HLA-DR蛋白表达的诱导作用。进一步研究发现,哇巴因促进HLA-DR表达依赖于c-Src。哇巴因能激活HLA-DR启动子。通过构建pGL3-HLA-DRα启动子报告质粒以及突变X-box的突变体报告质粒并进行Luciferase活性检测,发现50nM哇巴因能显著增强pGL3-HLA-DRα启动子Luciferase活性,而突变体Luciferase活性没有显著变化,干扰RFX5后,哇巴因促进HLA-DR表达的能力显著降低。本文的创新点在于:（1）发现哇巴因、IFNγ在促进人单核细胞表面HLA-DR表达上具有相似的作用;（2）发现CIITA4在哇巴因激活人单核细胞表面HLA-DR表达中的作用,并初步解析哇巴因调控CIITA4表达的分子机制;（3）将哇巴因-钠钾ATP酶-c-Src非经典通路与HLA-DR表达联系在一起,拓宽了哇巴因作为免疫调控因子的作用机制。在今后研究中,将进一步深入探讨哇巴因激活HLA-DR表达的分子机制和信号传导过程,以及在脓毒症免疫麻痹治疗中的作用。