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前言 抑郁症是一种以心境低落为主要特征的精神疾病综合征。目前临床上，治疗抑郁症的主要药物是以氟西汀为代表的五羟色胺特异性再摄取抑制剂(Serotonin-specificReuptakeInhibitors，SSRIs)。但是，氟西汀抗抑郁症确切药理机制还有待进一步研究。 瞬时受体电位通道（TransientReceptorPotentialchannels，TRP）是位于细胞膜上的一类重要的非选择性阳离子通道超家族，其中经典瞬时受体电位通道蛋白（CanonicalTRP，TRPC）在哺乳动物脑组织中表达广泛。TRPC主要参与细胞膜受体激活磷脂酶C(PLC)后所介导的钙离子内流，胞内钙库释放后可激活TRPC，引起胞外钙内流，填充钙库。TRPC此时起着钙库操纵性钙离子通道(store-operatedcalciumchannel，SOCC)的作用。研究显示TRPC1是非电压依赖的、钙库操纵性钙离子通道(SOCC)的主要核心成分之一，是星形胶质细胞Ca+内流的主要通道，可调节细胞内Ca2+稳态浓度。 近年来，在研究钙库操纵性钙内流（store-operatedcalciumentry，SOCE）的过程中发现，Ca2+释放激活Ca2+通道蛋白质1（calciumrelease-activatedcalciumchannelprotein1，Orai1）和基质相互作用分子1(stromalinteractionmolecule1，STIM1)，它们对Ca2+库和细胞膜(plasmamembrane，PM)中Ca2+内流之间相偶联的机制起着至关重要的作用。 Orai家族是最近发现的一种四次跨膜钙离子通道蛋白，是一种高选择性Ca2+通道—钙释放激活的钙调节蛋白通道的构成蛋白，它包括三个成员:Orai1、Orai2和Orai3。研究发现，所有Orai都有增强SOCE的作用，但Orai1的作用最强。 基质相互作用分子(STIM)包括STIM1和STIM2。STIM1是一种主要存在于ER上的Ⅰ型跨膜蛋白，它具有感受钙池充盈状态，并将感受信号通过不同蛋白作用机制传递给TRPC及Orai通道的双重功能，是共同介导SOCE的关键分子。 本课题组以往报道氟西汀长期处理星形胶质细胞后抑制细胞内钙离子再充功能并使激动IP3R或RyR引发钙离子释放减少。星形胶质细胞中，TRPC1的基因敲除可降低氟西汀急性作用诱导的细胞内钙离子升高，氟西汀长期作用可消除氟西汀、Dex急性作用诱导的细胞内钙离子上调，以上提示TRPC1在氟西汀的长期作用下可能存在表达的异常，因此需要进一步研究氟西汀长期作用对星形胶质细胞TRPC1及Orai1、STIM1基因表达的影响。 方法 本实验从原代培养星形胶质细胞，整体动物，转基因动物三个水平通过RT-PCR、免疫印迹方法及流式分选法研究氟西汀长期作用对TRPC1、Orai1、STIM1基因表达的影响。应用基因敲除法研究星形胶质细胞中TRPC1和Orai1的表达，荧光探针技术测定细胞内Ca2+浓度。 使用SPSS12.0软件进行统计学分析，多组资料用one-wayANOVA方法进行比较，P＜0.05表示差异具有统计学意义。 结果 1、氟西汀长期作用对原代培养的星形胶质细胞TRPC1、Orai1及STIM1基因表达的影响。 1μM氟西汀处理原代培养的星形胶质细胞3天、1周、2周后收集细胞，3天时，TRPC1、Orai1表达无明显变化，1周时下降，2周仍下降，STIM1的表达3天、1周、2周均无明显变化。 2、氟西汀长期作用对整体动物脑内TRPC1、Orai1及STIM1基因表达的影响。 氟西汀10mg/Kg腹腔注射小鼠2周后取脑，TRPC1、Orai1的表达显著降低，STIM1的表达无明显变化。 3、氟西汀长期作用对转基因小鼠星形胶质细胞和神经元细胞中TRPC1、Orai1mRNA表达的影响。 氟西汀10mg/Kg腹腔注射转基因小鼠2周后经FACS分选，星形胶质细胞中TRPC1、Orai1表达显著降低，神经元中没有明显变化。 4、星形胶质细胞中Orai1基因敲除后TRPC1、Orai1的mRNA表达。 星形胶质细胞经Orai1基因敲除后，Orai1mRNA表达明显下降，TRPC1mRNA表达无明显变化。 5、Orai1基因敲除抑制星形胶质细胞中Ca2+再冲功能。 与Orai1siRNA(-)细胞相比，星形胶质细胞经Orai1siRNA敲除后能明显抑制细胞内Ca2+的增加。 结论 星形胶质细胞中，氟西汀长期作用可以明显下调TRPC1、Orai1基因表达，对STIM1的mRNA表达无明显影响。Orai1具有SOC通道蛋白的功能，是保持SOCE正常功能所不可或缺的一部分。因此，氟西汀长期作用通过使TRPC1、Orai1表达的下降，降低其功能作用，从而减少SOCE调节的细胞Ca2+内流。