弧菌(Vibrio)广泛分布在海洋、江河和湖泊的水体中,从两极的极冷环境到赤道的热带环境的水域中都有分布,随着人们生活水平的提高,对海产品的需求量越来越大,弧菌已然成为了威胁水产养殖和人们的身体健康的重要病原菌,但是弧菌的种类繁多,使在检测和防治方面受到了巨大的挑战,所以建立弧菌的多重检测和基层检测是非常必要的。副溶血弧菌是弧菌中威胁水产养殖的重要病原弧菌,每年都会造成巨大的经济损失,副溶血弧菌有两条染色体,每条染色体上各有一个不同的外膜蛋白ompA的编码基因,分别为VP0764和VPA1186两段基因,取这两段基因分别设计两对引物,F/R引物上分别具有BamH和Sacl酶切位点,用BL21载体进行蛋白表达,纯化鉴定之后用来制备多抗,然后进行免疫磁珠的制备进行菌体捕捉。以副溶血弧菌的毒力因子基因(vptdh)和特异性基因(vptox)、霍乱弧菌的肠毒素基(vcctx)和外膜蛋白基因(vcomp)和溶血素基因(vchly)、拟态弧菌的溶血素基因(vmha)和特异性基因(vmtox)、创伤弧菌的溶血素基因(vvha)和创伤弧菌多重毒素基因(vvrtx)、溶藻弧菌的胶原蛋白酶基因(vacol)为目的基因设计引物和特异性微球探针,进行液相芯片技术实验研究。设计的引物与五种弧菌以及大肠杆菌、沙门氏菌进行PCR扩增,产物与特异性探针杂交读数,证明得到液相芯片技术具有很好的特异性;特异性探针与不同菌浓度的PCR产物进行杂交,证明得到其具有很高的灵敏度;十种特异性探针分别与单一PCR产物和混合PCR产物进行杂交,证实液相芯片技术多重检测的可操作性。搜索创伤弧菌溶血素A基因(hemolysin gene A,HA)和多重毒素(repeats in toxin,RTX)毒力基因的并设计两种基因的内、外引物,进行LAMP检测目的基因和人工模拟样品,通过肉眼观察白色沉淀,初步判断检测结果,再通过琼脂糖凝胶电泳进一步确认检测结果。LAMP检测两种目的基因灵敏度达到10 CFU/ml,人工模拟样品检测的灵敏度分别为1×102CFU/g(VV-RTX)和1×104CFU/g(VV-HA),与普通PCR比较,具有较高的灵敏度,同时具有用时短,成本低,适合用于基层等优点。