【摘 要】
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为探讨氟化物在氟中毒所致骨相损害中的毒性作用，本研究以2～3月龄胎绵羊颅盖骨为材料，采用酶完全消化法分离成骨细胞，通过形态观察(Giemsa染色)和钙化结节(茜素红法)染色鉴定成骨
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为探讨氟化物在氟中毒所致骨相损害中的毒性作用，本研究以2～3月龄胎绵羊颅盖骨为材料，采用酶完全消化法分离成骨细胞，通过形态观察(Giemsa染色)和钙化结节(茜素红法)染色鉴定成骨细胞，并进行传代培养；从体外培养的成骨细胞中提取总。RNA，经RT-PCR扩增Bcl-2和Bax基因的部分序列，PCR产物连接pGEM-T Easy载体，转化进感受态细胞DH5α，经克隆、蓝白斑筛选、质粒酶切鉴定后，将阳性菌液送交测序公司测序以再次进行验证：利用实时荧光定量PCR检测不同浓度NaF对体外培养成骨细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响。结果表明：
1、成功扩增出bcl-2和bax基因的部分序列；引物特异性高，可进行后续的荧光定量PCR工作。
2、1.0×10<-5>mol/L NaF组Bcl-2基因表达水平较对照组高，其他组Bcl-2表达水平均比对照组低；各NaF浓度组Bax基因表达量均比对照组高，且5.0×10<-4>mol/L组最高：除1.0×10<-5>mol/L NaF组外，Bcl-2/Bax比值均比对照组低，且5.0×10<-4>mol/L组最低。
NaF能增加成骨细胞线粒体膜的通透性，下调bcl-2 mRNA表达，上调bax mRNA表达，启动了线粒体凋亡信号转导途径。
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