【摘 要】
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本研究采用内切酶消化的方法对含有HBV adw2亚型全基因序列的质粒pUVN4进行双酶切，获取含HBV-RT的片段，将其克隆到大肠杆菌表达载体pQE30中，构建了原核表达质粒pQE30-RT。 将
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本研究采用内切酶消化的方法对含有HBV adw2亚型全基因序列的质粒pUVN4进行双酶切，获取含HBV-RT的片段，将其克隆到大肠杆菌表达载体pQE30中，构建了原核表达质粒pQE30-RT。
将构建好的重组质粒pQE30-RT转化到大肠杆菌DH5a中，用IPTG进行了诱导表达。重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳，可检测到相对分子量约44KD的重组蛋白，以包涵体形式表达。对表达的重组蛋白用镍离子柱亲和层析法进行纯化，经SDS-PAGE分析：咪唑浓度为100mM的BufferⅢ能够将目的蛋白洗脱下来。
利用表达的重组蛋白作为抗原，初步建立了检测HBV-RT抗体的间接ELISA方法。结果表明：抗原的最适包被浓度为1ug/mL，最适包被条件为4℃过夜，待检血清稀释度为1：100，HRP-山羊抗人IgG的工作浓度为1：100K。成功地从177份慢性乙肝病人血清中检测出anti-HBV-RT抗体，大三阳、小三阳和一五阳性的乙肝病人血清中anti-HBV-RT抗体阳性率分别为20.7％、56.3％和18.2％，平均为27.1％。
本研究为HBVIRT抗体检测试剂盒的研制和进一步进行抗HBV-RT胞内抗体的研究奠定了基础。
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