食品安全问题已经成为当今世界关注的焦点问题之一。近年来,盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CBL)残留致使食物中毒的报道屡见报端,严重危害了人们的健康与生命。时间分辨荧光免疫分析方法(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)是近十年发展起来的一种新兴的非放射性免疫标记技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,并且非常适合大规模样品的筛选。本论文旨在开发具有我国自主知识产权的高灵敏、快速检测CBL的TRFIA试剂盒。首先,重氮化的CBL分别与血蓝蛋白(Keyholelimpet hemocyanin,KLH)和卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)交联,合成免疫抗原CBL-KLH和包被抗原CBL-OVA。免疫原CBL-KLH按免疫程序免疫新西兰大白兔,产生的抗血清效价高达1∶204800。以此抗体为基础,设计了间接竞争两步TRFIA(CBL-TRFIA)方法:固相CBL与游离CBL共同竞争有限的抗CBL抗体,用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪。研制出可方便得应用于各个实验室中的间接竞争CBL -TRFIA检测试剂盒。此TRFIA试剂盒灵敏度达到:0.0076μg/L,比酶联免疫吸附检测法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)高了10倍,显示了该检测方法的优越性。体液(尿液和血液)和组织回收率为80%-120%。通过精密度、准确度、稳定性和特异性等参数来评估此检测方法,并与CBL-ELISA试剂盒进行了比较。结果表明,此间接竞争CBL-TRFIA试剂盒各项指标符合标记免疫试剂的要求,并能达到实际检测的需要。