母乳是婴儿肠道菌群的重要来源。母乳中的有益菌主要由肠-乳腺途径从母亲肠道传递而来。工业化过程引起过度清洁、抗生素使用和饮食改变等引起肠道和母乳群改变,影响婴儿肠道和免疫发育,造成过敏性疾病和慢性代谢病流行。补充工业化过程“消失”的有益菌,是预防这些疾病发生的营养干预途径。本研旨在研究工业化和传统农牧地区母乳菌群构成,筛选后者特有的有益菌,并评价其调节调节幼鼠免疫发育的作用和缓解高脂饮食诱导脂代谢紊乱的效果。本研究通过探索母乳中乳杆菌的种群发生规律、评估其益生特性,分离并筛选出传统农牧地区（甘肃临潭）特有的潜在益生菌（罗伊氏乳杆菌FN041）;然后利用高脂饮食喂养小鼠模型探究了FN041对高脂症引起的血脂异常和肠道粘膜屏障损伤的缓解作用及其对肠道菌群昼夜变化的影响;最后通过研究了母代在妊娠期、断奶期,或子代小鼠在断奶后摄入FN041,对子代小鼠肠道免疫功能的影响。主要研究结果如下:1.基于国家疾控中心从我国11个城市收集的89位健康乳母的第42天成熟乳样本,分别用MRS和结肠细菌厌氧培养基进行活菌富集培养,然后用16S r RNA基因（v3-v4区）扩增子测序分析菌群构成。结果表明,母乳细菌组成呈区域特异性,西北和北方样本的α多样性较高,乳杆菌以西北和北方较高,其中甘肃临潭样本的核心菌种包含罗伊氏乳杆菌和格氏乳杆菌。产后体质指数分别与母乳乳杆菌和葡萄球菌的相对含量呈负和正相关。母乳乳杆菌和链球菌与葡萄球菌的相对含量呈负相关。本研究中母乳可培养菌群的优势菌属依次为葡萄球菌、链球菌、肠球菌和乳杆菌。还可以检测到细小杆菌、双歧杆菌、丙酸杆菌、耶尔森氏菌和其他细菌（丰度小于1%）。2.采用兔抗人Ig A血清结合链霉亲和素修饰磁珠方法,富集了甘肃临潭母乳的Ig A结合菌群,用选择性培养基分离到了11株罗伊氏乳杆菌,其中菌株FN041在p H=2.53h存活率为85%,在0.3胆盐培养基3h存活率为86%,具有良好的耐酸耐胆盐能力;它粘附粘液素的能力为鼠李糖乳杆菌GG的4.25倍;它对常用的抗生素敏感,不具耐药性。因此,FN041是一株潜在的益生菌。对FN041进行了全基因组测序及分析,结果表明,组装的FN041基因组大小为2.4 Mb,包含2个质粒,GC含量为38%,预测得到2442个基因,18个r RNA,75个t RNA。构建16S r RNA基因序列系统发育树分析显示,FN041与模式菌株罗伊氏乳杆菌JCM 1112具有共同的祖先。3.应用高脂饲料喂养诱导小鼠出现高脂症,并评估FN041对血脂异常和肠道粘膜屏障损伤的缓解作用,发现FN041干预显著降低了高脂饮食诱导的小鼠体重增加、睾周脂肪积累、活动期运动活性增加。FN041干预可以显著降低高脂饮食诱导的高胆固醇血症、肝脏Fas基因m RNA的上调表达和Srebp1c基因的m RNA下调表达。FN041可以在一定程度上治疗高脂饮食引起的内毒素血症和粘膜屏障损伤。FN041显著影响高脂饮食诱导的小鼠肠道菌群构成及其代谢产生的短链脂肪酸的变化,且该变化与昼夜节律有显著相关性。4.母乳中的乳酸菌垂直传递至婴儿肠道后,可影响后代肠道免疫系统发育。为进一步探究FN041对子代肠道免疫的调节能力,本研究进行了FN041干预的繁育实验。母鼠与公鼠按3:1合笼交配分娩后,哺乳期母鼠分为两组,即正常组和FN041灌胃组;3 w断奶后,处死母鼠及对应组雌雄幼鼠,其余幼鼠按照正常组、仅干预母代、仅干预子代和同时干预母代和子代进行分组,干预至5周。研究结果表明:FN041所有干预措施均可导致5周龄后代肠道屏障功能增强,尤其是雌性后代;共干预组5周龄后代结肠组织免疫球蛋白A浆细胞和结肠粪便分泌型Ig A（s Ig A）均增加;小鼠回肠有17个肠道粘膜屏障相关基因m RNA表达被激活且其差异表达与性别有关,尤其是在5周龄的雌性后代中;共同干预对5周龄仔鼠肠道微生物Shannon指数的影响与性别有关,而s Ig A包裹菌群的Shannon指数在两性中均呈上升趋势。s Ig A包裹的肠道微生物根据β多样性表现出组间差异,雌性小鼠中放线菌门和双歧杆菌属增加。此外,将微生物结构与肠道粘膜屏障建成相关基因进行相关性分析后可发现,s Ig A包裹的双歧杆菌属与Tlr9 m RNA表达呈正相关,雄性后代中s Ig A包裹的乳杆菌属与Cldn2 m RNA表达呈负相关。总之,甘肃临潭母乳罗伊氏乳杆菌检出率高于其他城市,本研究分离的典型益生性菌株罗伊氏乳杆菌FN041可缓解高脂诱导小鼠高脂症和调节脂代谢节律,母代摄入可促进子代肠道免疫发育,本研究为FN041的产业化应用提供了理论依据。