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[背景与目的]
脑卒中是全球性的公共卫生问题,具有发病率高、致残率高、死亡率高的特点,2003年美国心脏病协会统计每年用于治疗脑卒中的费用约为512亿美元,给患者本人、其家庭和社会都带来了沉重的负担。为减轻这种负担,最好的办法是了解脑卒中的危险因素和发病机制,并对其进行有效的预防。目前较为一致的观点是脑卒中是一组复杂疾病,是遗传因素和环境因素相互作用和相互影响的结果。然而其相互作用和相互影响的机制目前还不清楚。
流行病学调查研究表明,脑卒中的危险因素可分为可干预性和不可干预性两类,可干预性危险因素包括高血压、心脏病、糖尿病、高血脂、高同型半胱氨酸血症、短暂性脑缺血发作(TIA)、吸烟、酗酒、肥胖、无症状性颈动脉狭窄、口服避孕药物等;不可干预性危险因素包括年龄、性别、种族和遗传因素等。但随着人类基因组计划的完成,后基因组时代的到来,通过筛选疾病的易感基因及研究基因的结构与功能,可以使遗传因素逐渐成为脑卒中的可干预危险因素。有研究发现脑卒中具有家族聚集现象,同卵双生子脑卒中的发病率是异卵双生子的5倍,这些均说明机体存在易感性,表明遗传因素在脑卒中的发病中发挥着重要作用。脑卒中的分子遗传基础也成为了近年来生物医学的研究重点。
19世纪70年代,限制性内切核酸酶技术和基因扩增技术以及随之而来的DNA直接测序,引发了对DNA多态性的研究。DNA多态性(DNA polymorphism)本质上是核苷酸排列顺序的差异性。目前在全世界范围内广泛应用的是PCR.RFLP技术,利用限制性片断长度多态性(RFLP,restriction fragment lengthpolymorphism)作为第一代DNA标记用于人类基因组研究。该技术通过对片断多态性的信息与疾病表型间的关系进行连锁分析,找到致病基因。随着基因组研究的发展,单核苷酸多态性标记(SNP,single nucleotide polymorphysm)成为最新的遗传标记系统。在此基础上发展起来的使用SNP图谱进行连锁分析及关联分析则是人类基因组学及筛选复杂疾病致病基因技术方面的又一个划时代的革新,具有极好的发展前景,然而其造价高,技术含量高,且处在不断成熟和完善的过程中,因此需要比较长的时间才能得到普遍的推广应用。遗传分析的最主要的特点和最大长处是摒弃了疾病发生中漫长的、多因子参与的、复杂的生理生化过程,把疾病看成是基因(一个或多个)决定的表现型。利用这一点可将其用于分析单基因遗传病和机制杂的多基因遗传病。遗传分析也有其缺点,主要表现在人种差异和种族差异的影响使得某个地区的研究结果有一定的局限性。包括限制性片断长度多态性和单核苷酸多态性在内的相关研究结果都是建立在始祖效应(founder effect)和血缘统一(identical-by-discendant,IBD)的理论基础之上。因此要明确不同人种和不同种族缺血性脑卒中的易感基因及其基因多态性,必须对每个具有相同或相似遗传背景的群体分别进行研究,才能使研究结果更有的放矢地指导该人群的临床预防和基础科研工作。
识别脑卒中易感基因将有利于脑卒中的预防。然而当前有关脑卒中易感基因的病例对照研究可靠性参差不齐,使得研究结论中脑卒中易感基因的种类和数目有较大的不确定性,不免使人担忧:由于统计方法不恰当或效力不够,可能造成一些假阳性结果或假阴性结果。一个真正科学的病例对照研究需要几千的样本量,才够效力去研究等位基因频率在5﹪-10﹪的微效基因和中效基因;然而,实际上鲜有独立的研究可以达到如此大的样本量。Meta分析则可以利用所有已发表且符合入选条件的相关文章来增加统计效力,将似是而非的候选基因剔除,纳入可靠性更大的候选致病基因,以及更精确的评价致病基因的危险系数。另一方面,由于易感基因的研究结果可能因为种族的不同而产生差异,因此Meta分析需要在不同的种族和人种进行,使得研究结果更具有针对性得指导临床工作和科研研究。
本研究拟对目前已发表的所有有关中国人缺血性脑卒中易感基因及其多态性的病例对照研究进行严格质控后进行Meta分析,旨在明确以明确中国人缺血性脑卒中易感基因型的种类、数目并对其与疾病发生风险的大小进行评估;并分析与国外同类研究结果的差异,一方面揭示国人与白种人在脑卒中遗传背景方面的差异,另一方面也指导国内今后在此领域的进一步科研和临床工作。
[结论]
1.本研究证实了中国人缺血性脑卒中致病基因存在,均为微效基因,未发现缺血性脑卒中的主效基因。
2.本研究证实了与中国人缺血性脑卒中具有相关性的6个基因及其基因多态性,,它们分别是:ACED/I,MTHFR C677T,β-Fg-455A/G,β-Fg-148T/C,PAI-14G/5G,以及ApoEε<,2,3,4>基因多态性。
3.本研究证实了可以作为中国人缺血性脑卒中危险因素的7个基因型,其中ApoE携带ε4等位基因的基因型、ACE DD基因型、β-Fg-148TT+TC基因型、PAI-14G4G基因型、MTHFR 677TT基因型的致病风险性相当,而p.F g-455GA+AA基因型致病风险性相对较弱。
[背景与目的]
脑卒中是一组病因复杂的疾病,通过对双胞胎及阳性家族史等研究发现遗传因素在脑卒中的发病中发挥着重要作用。2002年有研究对已报道的166种疾病候选相关基因进行分析发现只有6种基因具有与疾病的高度相关性,而其中无一基因与脑血管病相关。另有对2003年1月份之前报道的32个缺血性脑卒中相关基因进行的Meta分析发现凝血因子V Leiderl突变(Factor V Leiden),亚甲基四氢叶酸还原酶基因(methylenetetrahydrofolate redtJctase,MTHFR),凝血酶原基因(Prothrombin)和血管紧张素还原酶基因(angiotensin-convertingenzyme,ACE)因其具有的基因多态性而可能是脑卒中的微效基因,但仍未发现一种脑卒中的主效基因。
2003年以来冰岛科学家对冰岛居民进行了全基因组扫描和后续的人类脑卒中病例对照研究,相继发现编码磷酸二酯酶4D(Phosphodiesterase 4D)的基因PDE4D和编码5-脂肪氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase activating protein,FLAP)的基因ALOX5AP是独立于传统危险因素以外的脑卒中危险因子,并且没有发现这两种基因存在功能性突变,而是从单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism,SNP)角度论证了基因与脑卒中的相关性。然而,后续有关PDE4D和ALOX5AP与人类脑卒中相关性的研究,在其他不同地区和人群(种)中的研究结论却不一致,目前认为造成这一现象的可能原因是由于种族和地区差异,这需要在更大的临床样本,更多的人群中验证;但更重要的是需要进行系统的动物实验研究。
目前的观点认为脑卒中是一种多基因病,其微效基因是影响数量性状——疾病易患性的重要因素,它们没有功能性的基因突变,但其基因表达量与疾病的发生却密切相关。微效基因的作用具有累积性的特点,且对环境因素的变化非常敏感。当某个或/和某些微效基因在与环境因素相互或交互作用下其基因表达水平(主要为mRNA水平)累积减少或增加到疾病阈值时,就会通过自身作用或激活其他旁路共同作用,介导脑卒中的发生。本实验旨在通过使用易卒中型肾血管性高血压大鼠(stroke-pronerenovascular hypertensive rats,RHRSP),在动物水平评价脑卒中易感基因PDE4D和ALOX5AP mRNA水平的变化规律与高血压性脑卒中和高血压病的相关性。
[结论]
1.统计学的结论:自发卒中组PDE4D和ALOX5AP的mRNA表达水平明显高于其他组。PDE4D在血压正常组、梯度高血压Ⅱ组和Ⅲ组的表达量无统计学差异,PDE4D在梯度高血压Ⅰ组的表达量稍高于前三者;ALOX5AP在血压正常组和梯度高血压组的表达量无统计学差异。
2.动物实验表明PDE4D和ALOX5AP基因过表达均与高血压性脑卒中存在相关性,两基因与高血压病本身无显著相关性,是脑卒中的独立危险因素;两基因的过表达可能通过参与动脉壁的炎症反应从而介导脑卒中的发生。