肾母细胞瘤中ABCG2的表达及侧群的初步检测

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引言:越来越多的证据表明,肿瘤中存在一小部分具有“干细胞”性质的细胞亚群,即肿瘤干细胞(Tumor stem cells, TSC)。它们具有自我更新、多向分化、永生等潜能,与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移、耐药、复发等密切相关。这类细胞在白血病、乳腺癌等肿瘤中相应得到证实。但作为儿童常见腹部实体恶性肿瘤之一的肾母细胞瘤(Nephroblastoma/Wilms’tumor, WT)是否存在肿瘤干细胞还没有明确答案。肿瘤干细胞检测通常有表面抗体标记,侧群检测,以及悬浮球形成试验等方法。侧群(Side population, SP)检测的主要原理是“干细胞”可以通过ABCG2(ATP结合转运蛋白G超家族成员2)将荧光染料Hoechst33342泵出细胞,实现耐药特征,该过程称为拒染。用这种方法可以富集肿瘤干细胞。但是目前还没有肾母细胞瘤中ABCG2的表达及侧群检测的相关报导。本实验首先应用免疫组化法了解肾母细胞瘤中ABCG2的表达情况,然后应用侧群方法来检测原代WT中是否含有SP细胞及其表达,进一步验证SP细胞是否具有肿瘤干细胞特性目的:肾母细胞瘤是小儿泌尿系统最常见的腹部实体肿瘤,它具有恶性性质,据儿童肿瘤发病率第四位。它通常被认为是生长中胚胎肾脏发育失败的一个模型。但是肾母细胞瘤的细胞起源至今还不确定。最近的基因学、遗传学等研究均指向一种早期的肾脏干/祖细胞恶性转化,这可能是肾母细胞瘤的来源。在这里,我们通过检测肾母细胞瘤中肿瘤干细胞标记物ABCG2的表达,了解它的表达情况,同时了解是否可以应用拒染方法检测该肿瘤中的侧群细胞(Side population, SP),并进行初步应用。方法:1、收集2009年1月至2011年5月34例肾母细胞瘤手术标本,进行免疫组化S-P方法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)检测肿瘤干细胞标记ABCG2的表达。2、收集6例手术新鲜组织标本进行原代培养,制取单细胞悬液,进行荧光染料Hoechst33342染色,在荧光显微镜观察是否含有拒染的细胞;并使用流式细胞仪检测侧群的表达。结果:1、肾母细胞瘤中存在ABCG2的表达,表达量约76.4%(26/34);2、6例新鲜组织中3例经染色后在荧光显微镜下发现少量染色浅的拒染细胞;3、流式细胞仪检测到原代肾母细胞瘤中含有少量可被维拉帕米阻断的拒染细胞,其表达量约为0.7%。结论:肾母细胞瘤中存在ABCG2的表达,可能与肿瘤耐药相关;应用拒染方法可以测得原代肾母细胞瘤中含有小群SP细胞,它们中可能含有肿瘤干细胞。
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