论文部分内容阅读
第一部分 肾脏肾素血管紧张系统在儿童免疫性肾病中的变化研究目的观察免疫性肾病患儿肾组织中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、血管紧张素转换酶1(ACE1)、血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]、血管紧张素转换酶2(ACE2)表达及尿血管紧张素原(uAGT)含量在儿童免疫性肾病中的变化,探讨局部肾素血管紧张素系统(RAS)激活与病情严重程度的相关性及uAGT作为反应肾内RAS活性标志物的可能性。方法对经肾活检明确病理的原发性肾病综合征(PNS)21例、IgA肾病(IgAN)30例,急性链球菌感染后肾小球肾炎(APSGN)5例,C3肾小球肾炎(C3GN)1例,紫癜性肾炎(HSPN)103例,狼疮性肾炎(LN)11例,肝豆状核变性(HLD)伴肾损伤1例进行横向研究。评估患儿的一般情况、临床指标,采用免疫组织化学法检测Ang Ⅱ、ACE1、AAng-(1-7)、ACE2在儿童肾脏内的表达,ELISA法检测患儿uAGT的变化;应用计算机图像处理系统分析免疫组化结果;并分析uAGT与肾内RAS成分表达含量及24h尿蛋白排泄量的相关性。以病理结果为肾小球轻微病变44例作为肾脏免疫组化对照组,以2018年6～12月我院儿保科50例健康体检儿作为正常组检测血、尿指标。结果(1)与对照组相比,PNS患儿肾内Ang Ⅱ、ACE1表达增高,ACE2、Ang-(1-7)表达下降(P<0.05);与正常组及对照组相比,PNS组uAGT/uCr水平增加(P<0.05);uAGT/uCr水平与肾脏内RAS表达、24h尿蛋白排泄量具有相关性(P<0.05);(2)与对照组相比,IgAN患儿肾内Ang Ⅱ、ACE1表达增高,ACE2、Ang-(1-7)表达下降(P<0.05),且随病理级别加重,差异越加明显;与正常组及对照组相比,IgAN组uAGT/uCr水平增加(P<0.05);uAGT/uCr水平与肾脏内RAS表达、24h尿蛋白排泄量具有相关性(P<0.05);(3)与对照组相比,HSPN患儿肾内Ang Ⅱ、ACE1表达增高,ACE2、Ang-(1-7)表达下降(P<0.05),且随病理级别加重,差异越加显著;与正常组及对照组相比,HSPN组uAGT/uCr水平增加(P<0.05);uAGT/uCr水平与肾脏内RAS表达、24h尿蛋白排泄量具有相关性(P<0.05);(4)与对照组相比,LN患儿肾内Ang Ⅱ、ACE1表达增高,ACE2、Ang-(1-7)表达下降(P<0.05),ⅣV级中变化最为明显;与正常组及对照组相比,LN组uAGT/uCr水平增加(P<0.05);uAGT/uCr水平与肾脏内RAS表达、24h尿蛋白排泄量具有相关性(P<0.05);(5)与对照组相比,APSGN、C3GN、HLD伴肾损伤等免疫性肾病患儿肾内Ang Ⅱ、ACE1表达增高,ACE2、Ang-(1-7)表达下降;与正常组及对照组相比,APSGN、C3GN、HLD伴肾损伤组uAGT/uCr水平增加。结论儿童多数免疫性肾病存在局部RAS激活现象,RAS活性与病情严重程度有相关性;uAGT/uCr可以作为反映肾内RAS活性的标志物,对评估肾脏疾病严重程度具有重要临床意义。第二部分血管紧张素(1-7)通过抑制NF-κB通路保护脓毒症急性肾损伤的研究目的观察脂多糖(LPS)诱导小鼠脓毒症急性肾损伤(SA-AKI)的发生情况及血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对SA-AKI小鼠肾脏组织形态学、肾脏血管紧张素系统(RAS)、炎症反应、氧化应激及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨SA-AKI小鼠肾脏RAS活化与NF-κB信号通路激活的关系及Ang-(1-7)对SA-AKI小鼠保护作用的分子机制。方法应用颈内注射脂多糖(LPS)方法建立SA-AKI小鼠实验模型,C57BL/6近交系雄性小鼠80只,按随机数字表分为正常对照组、Ang-(1-7)组、脓毒症组(LPS组)、脓毒症加Ang-(1-7)组[LPS+Ang-(1-7)组]4组,每组20只。实验第15天杀鼠后取血标本和肾组织标本,应用全自动生化分析仪检测小鼠血清中尿素氮、肌酐水平,ELISA法检测血清、肾组织中炎症指标变化,化学比色法检测肾皮质氧化应激指标改变、免疫组织化学技术观察肾组织血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)表达情况,Western Blot检测肾组织NF-κB-p65、IκBα蛋白的表达,并观察肾组织病理改变。结果(1)与正常对照组相比,SA-AKI组小鼠血清肌酐、尿素氮上升(P<0.05);炎症指标TNF-α、IL-1β、IL-6,脂质过氧化产物MDA明显上升,肾组织中Ang Ⅱ表达及NF-κB磷酸化水平明显增加,抗氧化产物SOD、T-AOC及肾组织中IκBα蛋白表达明显下降(P<0.05);肾组织病理肾损伤明显;(2)Pearson相关分析显示肾脏Ang Ⅱ含量与NF-κB-p65相对蛋白含量呈正相关,与IκBα相对蛋白含量呈负相关(P<0.05);(3)Ang-(1-7)干预组小鼠尿素氮、肌酐、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,MDA含量,及肾组织Ang Ⅱ表达、NF-κB磷酸化水平均低于SA-AKI组,SOD、T-AOC及IκBα蛋白含量均高于SA-AKI组(P<0.05);病理显示肾损伤减轻。结论(1)LPS诱导SA-AKI小鼠存在肾脏RAS过度激活,肾组织Ang Ⅱ表达增加,炎症损伤及氧化应激反应严重,肾脏炎症通路NF-κB活化;(2)SA-AKI小鼠肾组织RAS活性与NF-κB活化程度相关;(3)Ang-(1-7)能够通过降低肾脏Ang Ⅱ水平,下调NF-κB通路的表达,减轻炎症反应及氧化应激,保护SA-AKI。