研究背景及意义： 慢性肺源性心脏病(简称慢性肺心病)是一种常见病、多发病，肺动脉高压是慢性肺心病的一个重要的病理生理阶段，肺动脉高压早期，如果能及时去除病因或适当地进行对症治疗，有可能逆转病变或阻断病变的进一步发展；肺动脉高压晚期，病变处于不可逆阶段，治疗困难。目前，对于肺心病患者是否应用血小板活化抑制剂及适当抗凝治疗尚未达成共识。有研究发现肺心病的尸检病例中，段以上肺动脉血栓的发生率约为10.9﹪～53﹪，文献报道肺心病急性发作期尸检病例肺细小动脉血栓发生率为89.8﹪，且均为原位血栓形成，这提示血小板在肺心病的发生、发展及其转归中可能起着重要作用，血小板活性与慢性肺源性心脏病关系受到广大医学科学工作者的重视。近年来，血小板活化释放的主要分子标记物PAC-1、CD62p越来越引起注目。 PAC-1是活化血小板膜糖蛋白GP Ⅱb/Ⅲa的抗原决定簇，GPⅡb/Ⅲa属于整合素受体家族、Ca<2+>依赖性二聚体复合物，在血小板聚集过程中起重要作用。GP Ⅱb/Ⅲa能表达多种血小板受体功能，所联结的配体包括纤维蛋白原等黏附蛋白分子。GP Ⅱb/Ⅲa与这些黏附分子的结合在血小板活化后才发生，静息血小板并无此作用。在诱导剂致使血小板活化时，GPⅡb/Ⅲa分子上的纤维蛋白原受体暴露，在Ca<2+>的作用下，纤维蛋白原可与之结合，从而连接相邻的血小板，充当聚集的桥梁，使血小板聚集成团。PAC-1是早期血小板活化的标志物。 CD62p亦称颗粒膜蛋白140kD(granule membrane protein 140，GMP-140)或P-选择素，主要位于血小板的α颗粒膜上，同时存在于内皮细胞的Weibel-Palada小体膜上，CD62p在未活化的内皮细胞膜上有一定数量的基础表达。在血小板活化时CD62p与血小板表面的质膜融合，并在血小板膜上表达或出现在血浆中。在静息血小板CD62p极少，因此在血栓性疾病的检测中有一定的参考价值，是后期血小板活化的标志物。CD62p还影响血小板的聚集。 血小板异常活化可能促进了肺动脉高压、肺心病的发生发展。既往许多研究者选用放免法测定血浆中可溶性CD62p作为血小板活化的血浆标志物，研究血小板活性与慢性肺源性心脏病关系，目前对这一方法尚存争议。有研究者担心因内皮细胞也可分泌可溶性CD62p而导致结果产生误差。另外有部分学者采用传统流式细胞术和特异性抗体分析患者离心后富血小板血浆中血小板表面CD41(GP Ⅱ b/Ⅲa的一个亚基)、CD62p的表达，研究血小板活性与慢性肺源性心脏病关系，目前对这一方法也存争议，由于血小板极易激惹活化，样本经离心、洗涤等步骤，容易人为地导致体外血小板激活，影响临床诊断价值。全血法流式细胞术尽可能避免血小板体外医源性激活，防止血小板亚群丢失，在最接近受检者体内环境的条件下测定血小板活化状态，同时不会受其它种类细胞或碎片的干扰，保证了检测的特异性。三色流式分析法是在常规流式细胞术检测基础上发展起来的一种多参数分析，同时在全血标本中加入三色荧光标记的单克隆抗体，一方面可以在全血标本中更好地有选择性地标识出静止血小板和活化血小板，避免样品制备过程中带入的误差干扰；另一方面三色荧光检测法获得信息广，从一份全血标本中可得知静止血小板、活化血小板的情况，可以更全面、更系统地获得血小板相关信息。本试验应用三色流式分析方法检测慢性肺心病患者全血，测定血小板活化分子标志物PAC-1、CD62p，并检测患者肺动脉压、动脉血氧分压、二氧化碳分压，探讨上述参数之间的相关性及慢性肺心病患者血小板活化的临床意义，以期对慢性肺心病患者应用血小板活化抑制剂及适当抗凝治疗提供临床及理论依据。 实验方法 1．慢性肺源性心脏病患者40名，基础疾病为慢性支气管炎和阻塞性肺气肿，健康体检者30名。用三色流式分析方法检测慢性肺心病患者与健康对照者全血，测定血小板活化分子标志物PAC-1、CD62p的表达。 2．用血气分析仪测定慢性肺源性心脏病患者动脉血氧分压、二氧化碳分压。 3．慢性肺源性心脏病患者用多普勒超声心动图检查，测定三尖瓣返流流速，经Bernoulli方程转换成肺动脉收缩压。结果1．40名肺心病患者血小板PAC-1阳性表达率(81.07±6.50)﹪、明显高于健康对照组(48.70±8.08)﹪(P<0.001)。 2．40名肺心病患者血小板CD62p阳性表达率(46.33±6.98)﹪，明显高于健康对照组(30.63±6.30)﹪(P<0.001)。 3．40名慢性肺心病患者平均肺动脉收缩压44.15±7.54mmHg。 4．40名慢性肺心病患者平均动脉血氧分压58.98±7.22mnHg，平均动脉血二氧化碳分压52.62±10.44 mmHg。 5．相关性分析发现：慢性肺心病患者血小板分子标记物PAC-1的变化与CD62p之间有显著的正相关(r=0.73，P<0.001)，慢性肺心病患者血小板PAC-1与肺动脉收缩压之间呈正相关(r=0.46，P<0.01)，与动脉血氧分压之间呈负相关(r=-0.35，P<0．05)，与动脉血二氧化碳分压之间呈正相关(r=0.48，P<0.01)；慢性肺心病患者血小板CD62p与肺动脉收缩压之间呈正相关(r=0.32，P<0.05)，与动脉血氧分压之间呈负相关(r=-0.48，P<0.01)，与动脉血二氧化碳分压之间呈正相关(r=0.46，P<0.01)。 结论 1．慢性肺心病患者血小板处于高活化状态，血小板分子标记物PAC-1、CD62p的表达明显增加。 2．慢性肺心病患者血小板分子标记物PAC-1与CD62p之间有显著的正相关。 3．慢性肺心病患者血小板分子标记物PAC-1、CD62p表达的程度与肺动脉压可能呈正相关。 4．慢性肺心病患者血小板分子标记物PAC-1、CD62p表达的程度与动脉血氧分压可能呈负相关、与二氧化碳分压可能呈正相关。