【摘 要】
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应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制哺乳动物细胞内多药耐药基因(mdr1)的表达.以pSilencer3.1-H1 Hypro质粒载体为基础,通过DNA重组技术,在载体中插入一段设计的序列,构建成新的质
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应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制哺乳动物细胞内多药耐药基因(mdr1)的表达.以pSilencer3.1-H1 Hypro质粒载体为基础,通过DNA重组技术,在载体中插入一段设计的序列,构建成新的质粒.将质粒转染到MCF-7/ADR细胞中,在质粒本身具有的H1 RNA聚合酶启动子作用下,以细胞内转录出具有3突出末端的发卡RNA.此发卡RNA作为小干扰RNA,封闭MCF-7/ADR细胞的mdr1基因,使其所表达的蛋白P-170减少,逆转MCF7/ADR细胞的多药耐药性.从而验证小干扰RNA在哺乳动物细胞内引发特异性基因沉默,期望为基因治疗开辟一条新的途径.结果:1.成功构建具有设计插入序列的pSilencer 3.1-H1 hypro质粒,通过限制性内切酶酶切图谱和测序分析,插入载体的核苷酸序列和设计完全体符合.2.转染质粒到细胞中,筛选转染成功的细胞.3.经流式细胞仪检测,MCF-7/ADR细胞P-170表达率由99.8﹪下降到12.3﹪;转染过GFP基因的LA795细胞GFP表达率由74.8﹪下降到10.6﹪.
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