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目的：
构建Bcl-2、BAG-1双靶区反义RNA重组载体pAsBAG-1-Bcl-2及单表达重组载体pAsBAG-1和pAsBcl-2，并初步研究它们对人胃癌细胞株SGC-7901增殖活性的影响，为进一步探讨该重组载体对肿瘤细胞的影响打下基础。
方法：
从胃癌细胞株SGC-7901总RNA中逆转录扩增包括全部编码序列的BAG-1和Bcl-2 cDNA，TA克隆到pMD18-T Simple载体，分别经BamH Ⅰ和Cla Ⅰ、EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并回收纯化目的片段后，反向插入真核细胞双表达载体pVITRO2的mcs1和mcs2中，经酶切、PCR和测序鉴定，确定已建立单表达重组载体pAsBAG-1和pAsBcl-2，再将Bcl-2反向插入单表达重组载体pAsBAG-1的mcs2中，构建双表达重组载体pAsBAG-1-Bcl-2，酶切、PCR和测序鉴定。然后分别转染SGC-7901细胞，在倒置显微镜下和HE染色观察细胞形态学变化，细胞计数观察SGC-7901细胞的生长情况，MTT法检测细胞的增殖活性，半定量RT-PCR检测基因BAG-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达，流式细胞术检测SGC-7901的细胞周期变化情况。
结果：
酶切、PCR和测序鉴定表明，单表达重组载体pAsBAG-1和pAsBcl-2及双表达重组载体pAsBAG-1-Bcl-2构建成功。与对照组比较，细胞计数及MTT法检测显示重组载体抑制SGC-7901细胞增殖，并呈时间依赖性，其中以72 h转染组抑制作用最显著(P<0.01)；经重组载体作用72 h，倒置显微镜下可见细胞明显减少，HE染色细胞可见凋亡小体形成；RT-PCR结果显示BAG-1 mRNA和Bcl-2mRNA表达水平明显下降(P<0.01)，而且pAsBAG-1-Bcl-2组比单表达载体组更为显著(P<0.05)，但pAsBcl-2组对BAG-1 mRNA表达水平无明显影响(P>0.05)；
流式细胞术检测重组载体组凋亡细胞比例升高，与pVITRO2组和对照组比较均有统计学意义(P<0.01)，并且pAsBAG-1-Bcl-2组的效应比单表达重组载体组更为显著(P<0.01)，凋亡率由对照组的0.57％增加至15.75％。
结论：
成功构建双靶区反义RNA重组载体pAsBAG-1-Bcl-2及单表达重组载体pAsBAG-1和pAsBcl-2，并发现其能抑制SGC-7901细胞增殖并引起细胞凋亡，且以pAsBAG-1-Bcl-2重组载体最为明显。