异源冷冻精子诱导大菱鲆和大西洋牙鲆雌核发育的研究

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本文探索了异源冷冻精子诱导大菱鲆(Scophthalmus maximus)和大西洋牙鲆(Paralichthys dentatus)雌核发育的条件,建立了采用冷冻保存的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)精液诱导这几种海水鱼类雌核发育的方法,并采用不同的方法对雌核发育后代做了分析鉴定。为大规模培育这几种鱼的全雌苗种奠定了基础。研究结果如下:1.鲈鱼精子,不管是否经过紫外线照射处理,都可以刺激大菱鲆卵开始胚胎发育过程,并且两组卵的胚胎发育过程完全相同。卵在(13±0.2)℃海水中大约95小时至出膜前期。由于没有经过染色体加倍化处理,两组胚胎均发育畸形,呈现出典型的单倍体综合症。实验组未发现有正常形态的仔鱼。从而确定,鲈鱼精子与大菱鲆卵子杂交所得后代即为大菱鲆的单倍体。通过对雌核发育冷休克起始时间,冷休克温度和冷休克持续时间的筛选和优化,确定了利用鲈鱼未灭活精子诱导大菱鲆卵雌核发育的最佳条件是:在13℃下授精6min后,用(-1~0)℃的海水对卵进行持续25min的冷休克处理。对孵出的仔鱼养殖5到7天,单倍体苗会全部死掉,剩下的正常形态苗种即为大菱鲆雌核二倍体。比较正常二倍体、单倍体和人工诱导雌核发育二倍体胚胎的发育速度和形态学特征,结果表明,不同胚胎发育速度有明显区别,表现为:正常二倍体和单倍体>人工诱导雌核发育二倍体。形态学上单倍体胚胎表现为头小,尾短,活动能力弱,破膜困难,人工诱导雌核发育二倍体胚胎则同正常二倍体胚胎同期特征一致。2.使用鲈鱼精子经紫外照射灭活后与大西洋牙鲆卵受精,按照受精后5min开始对卵进行3℃、30min的冷休克处理,获得了大批的仔鱼。对后代进行染色体技术鉴定,结果表明,未经冷休克处理的胚胎染色体数目为n=24,是大西洋牙鲆单倍体;而经冷休克诱导处理所得到的鱼苗染色体数为2n=48,即为大西洋牙鲆雌核发育鱼苗。
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