动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种发生于动脉血管的疾病。是导致冠心病、心肌梗塞等心脑血管病的主要原因,严重危害着人类健康,在西方发达国家和我国一直是主要的死亡原因之一。AS是一种多因素疾病,它受多种遗传因素和外界因素的影响。目前普遍被认为AS是由血脂代谢异常等多种因素引发的一种慢性炎症性疾病,它涉及多种细胞类型和多种生物学过程参与,如脂类代谢、细胞粘连、应激反应、细胞增殖和凋亡以及血液凝集,在每一生物学过程中又涉及多种基因参与和调控。研究这些基因在AS发生发展过程中动态的时序表达特征以及它们之间的相互作用机理,将有助于弄清该病的发病机理。载脂蛋白E（apolipoprotein E, aopE）和低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor, LDLR）双基因缺失(apoE^-/-/LDLR^-/-)小鼠由于apoE和LDLR双基因缺失引起的apoE及其主要受体途径受阻,普通饮食条件下就能表现出显著的高脂血症和AS病变,是目前比较常用的一种AS模型小鼠。但目前对apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠和AS的研究多集中于血脂代谢方面,与血管炎症损伤的关系以及AS发病的炎症反应机制仍不完全明确,尤其在AS早期,apoE和LDLR双基因缺失引发的脂代谢紊乱与血管炎症损伤的关系以及AS的炎症机制仍待进一步研究。本实验以apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠为模型,利用逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）以及实时定量RT-PCR技术检测炎症相关的重要基因在不同年龄段与野生型（wild type, WT）小鼠肝脏和主动脉中的时序表达差异,同时检测血脂和血清中炎症因子的变化,观察肝脏和主动脉内膜的病理形态改变,综合分析上述变化与AS发生发展的关系。结果显示:1)小鼠肝脏RT-PCR结果:14天和1月龄时apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠肝脏中的C反应蛋白（C-reactive protein, CRP）表达量较同龄WT小鼠显著升高（P<0.05）,但随着年龄的增长,表达量逐渐降至WT水平。14天龄时apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠肝脏中的白介素-1β（Interleukin-1β, IL-1β）和1月龄时肝脏中的肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）的表达量均显著高于同龄的WT小鼠（P<0.05）,并随着年龄的增长表达量逐渐升高,分别于3和2月龄时达到峰值。甘露聚糖结合凝集素（mannose binding lectin,MBL）在各年龄段apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠中的表达量与同龄WT小鼠相比均无显著差异。WT小鼠肝脏中所有靶基因各年龄段之间均无显著变化。2)主动脉RT-PCR结果:1月龄apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠主动脉中IL-1β、Toll样受体2（toll-like receptor-2, TLR2）、单核趋化蛋白1（monocyte chemotacticprotein-1, MCP-1）、细胞间粘附分子1（intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1）、血管粘附分子1（vascular adhesion molecule-1, VCAM-1）、GM-CSF、CD36和内皮素1（endothelin-1, ET-1）表达量均较同龄WT小鼠显著升高（P<0.05,P<0.01）。2月龄apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠主动脉中IL-1β、TLR2、MCP-1、ICAM-1、血小板衍生生长因子-α（platelet derived growth factor-α, PDGF-α）和TNF-α和表达量继续升高,GM-CSF和CD36与1月龄小鼠相比无明显差异,而ET-1和VCAM-1表达量降至WT小鼠水平。3月龄apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠主动脉中PDGF-α、TNF-α继续升高,IL-1β、GM-CSF和CD36与2月龄相比变化不大,MCP-1较2月龄略有下降,TLR2和ICAM-1降至WT小鼠水平。核转录因子-κB（nuclear factor-κB, NF-κB）和κB抑制剂（inhibitor-κB, I-κB）在各年龄段apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠中的表达量与同龄WT小鼠相比均无显著差异。WT小鼠中除IL-1β在2、3月龄较1月龄轻微上调外,其余基因各年龄段之间均无显著变化。实时定量RT-PCR结果与半定量RT-PCR结果基本吻合。3)血生化学检测:各年龄阶段apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglyceride, TG）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein , LDL）以及高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL）,TNF-α,IL-1β和氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein, OxLDL）水平明显高于同龄WT小鼠（P<0.05,P<0.01）。除OxLDL外均随年龄增长持续上升,在3月龄时达到最高,TC和LDL水平分别比WT小鼠升高约6倍和40倍,TG、HDL、TNF-α、IL-1β及OxLDL水平较同龄WT小鼠高出2-3倍。4)病理形态学检测:1月龄apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠主动脉内膜可观察到散在的轻微的脂质沉积病变;肝脏可观察到明显的肝脏脂肪变性,大小不等的脂肪滴出现于肝细胞质内。随年龄的增长至2和3月龄时,主动脉内膜病变区域增多,内膜增厚;肝细胞中的脂肪滴较1月龄时明显增多,肝脏脂肪变性程度加重,小不等的脂肪滴充满于肝细胞质内。14天龄apoE^-/-/LDLR^-/-小鼠以及各年龄段的WT小鼠主动脉均未观察到明显的苏丹Ⅳ阳性染色区,肝脏中未观察到明显的油红O阳性染色区。以上结果提示:ApoE^-/-/LDLR^-/-小鼠小鼠肝脏和主动脉中部分时序表达上调的炎症相关基因以及血清中升高的TNF-α、IL-1β及OxLDL,推测与血脂紊乱、肝脏脂肪变性以及主动脉AS病变形成密切相关,apoE和LDLR双基因缺失形成的高脂血症可能通过刺激肝脏和主动脉中炎症相关基因的时序表达,起始并扩大了AS病变部位的炎症反应,共同促进AS的发生发展。