γ-聚谷氨酸的产生菌分离鉴定及其生物合成条件的研究

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本研究旨在从多种样品中分离筛选出γ-聚谷氨酸(γ-PGA)高产菌种,并通过个体、菌落的形态及生理生化等特征,对目标菌株进行鉴定,命名为枯草芽孢杆菌纳豆亚种(Bacillus subtilis natto)QY-09。本研究对发酵培养基和发酵工艺条件进行探讨,即对碳源、氮源、谷氨酸钠、氯化钠、无机离子的浓度以及初始pH、温度、种龄、接种量、溶氧量进行了研究,建立了发酵过程曲线,探讨菌体生长与γ-PGA合成的关系。结果表明,发酵培养基和发酵工艺条件对γ-PGA的产率和生产成本有较大影响。高产菌株QY-09为谷氨酸依赖型菌株,培养基适宜配方为葡萄糖50g/L,大豆蛋白胨40g/L,谷氨酸钠40g/L,氯化钠30g/L,MgSO4 0.5g/L、CaCl2 0.3g/L、K2HPO4 3.0g/L、KH2PO4 4.5g/L及适量生物素。适宜的培养条件为:初始pH7.0,发酵温度37℃,种龄15h,接种量3%(V/V),装液量40mL/250mL,摇床培养56h,其γ-PGA产量可达32.7 g/L。发酵过程曲线表明γ-PGA的合成与菌体生长并非完全同步。本研究对纯化后产品(纯度为96.10%)的理化性质、结构特征、分子量测定、含量测定方法进行了探讨和分析。结果表明γ-PGA易溶于水,不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂,由单一的谷氨酸聚合而成。建立紫外分光光度法测定γ-PGA含量的方法,线性方程为A=0.493 c+0.0108,相关系数r为0.9981,平均回收率为99.5%,相对标准偏差为1.0%。凝胶渗透色谱、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对γ-PGA分子量研究表明,不同发酵时间的发酵产物分子量不同,发酵56h时γ-PGA相对分子质量在409~473 kDa之间,且56 h后,其相对分子质量范围分布逐步变宽。
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