肿瘤微环境中间充质干细胞对肺癌转移表征的改变及机制

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在我国,肺癌的发生率和死亡率都位居首位。肿瘤的侵袭转移涉及多步骤和多基因,肿瘤微环境(Tumor micro-environment,TME)发挥着重要作用。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是TME中关键组成细胞,分布于各种组织和器官,具有强大的自我更新能力和分化潜能,骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)为主要来源之一。目前,MSCs与肿瘤的关系在学界仍存在很多的争议,其联合免疫治疗有潜在联合治疗基础。目的:研究肿瘤微环境中的BMSCs对A549肺腺癌细胞株和H460大细胞肺癌细胞株增殖、迁移和粘附表征的作用,检测BMSCs侵袭转移关键分子NF-κB和PD-L1的表达,再基于肿瘤大数据挖掘,初步探讨BMSCs介导肿瘤转移的免疫相关作用机制,旨在为免疫联合细胞治疗肺癌转移的临床转化研究提供实验依据。方法:利用全骨髓贴壁法从Balb/c小鼠中分离培养BMSCs,通过诱导实验成验证其成脂和成骨分化能力,并用流式细胞术检测表面特异性抗原CD45,CD29和CD90。接着检测BMSCs与肺癌A549和H460肺癌细胞株共培养后PD-L1的表达情况并利用Western blot进行验证,再用Western blot检测其中的NF-κB的表达水平。最后,利用单细胞测序数据筛选肺腺癌转移潜能的关键基因和网络,选取关键蛋白SDCBP进行Western blot验证。结果:原代培养的BMSCs细胞经诱导可分化为脂肪细胞和成骨细胞,其表面抗原的阳性率分别为1.54%(CD45)、99.22%(CD29)和99.99%(CD90)。BMSCs培养上清可以同时抑制肺癌细胞株A549和H460的增殖、迁移和粘附表征。A549和H460中PD-L1和NF-κB的表达量不同,与BMSCs共培养之后,PD-L1和NF-κB的表达均降低。通过单细胞测序数据挖掘分子互作网络和预后价值,筛选出关键分子SDCBP,初步研究表明BMSCs抑瘤作用与NF-κB、PD-L1和SDCBP的表达密切相关。结论:本研究明确了作为TME重要成员的BMSCs对肺癌产生侵袭迁移表征抑制作用,基于肿瘤大数据挖掘,分析了肺腺癌的单细胞测序和预后资料,在实验和数据挖掘角度证实了NF-κB、PD-L1和SDCBP为BMSCs发挥抗肿瘤免疫作用的关键分子,骨间充质干细胞联合免疫检查点PD-L1抗体具有潜在的肿瘤治疗作用。
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