毕赤酵母(P.Pastoris)的rhIL-1表达量与载体—受体相关性研究

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白细胞介素1(IL-1)家族主要包括白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)等11个成员,是细胞因子网络中的关键成分。IL-1的生物学活性非常广泛,例如,激活造血系统和免疫系统,刺激淋巴细胞增殖,诱导单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞的抗肿瘤活性。因此,用基因工程技术表达该类蛋白,有重要的意义和应用价值。目前,常用的表达重组蛋白的毕赤酵母菌株有:GS115、KM71、X-33、SMD系列等。常用的分泌型表达载体有:pPIC9K、pPIC9、pPICZαA等。为了解不同的载体-受体组合对rhIL-1表达的影响,本文选择IL-1α、IL-1β和IL-1Ra三个基因,GS115、SMD1168和X-33三种受体菌,pPIC9K、pPIC9和pPICZαA三种载体,按排列组合原则构建它们的工程菌和检测它们的最佳表达量。结果表明,在rhIL-1α的表达中, X-33受体/pPICZαA载体组合的表达量最高,约为0.346mg/L。其他为: X-33/pPICZαA﹥GS115/pPICZαA﹥GS115/pPIC9K﹥GS115/pPIC9﹥SMD1168/pPICZαA﹥SMD1168/pPIC9K﹥SMD1168/pPIC9。在rhIL-1β的表达中, X-33受体/pPICZαA载体组合的表达量最高,约为0.553mg/L,其他为:X-33/pPICZαA﹥GS115/pPICZαA﹥GS115/pPIC9K﹥GS115/pPIC9﹥SMD1168/pPICZαA﹥SMD1168/pPIC9K﹥SMD1168/pPIC9。在rhIL-1Ra的表达中,X-33受体/pPICZαA载体组合的表达量最高,约为0.385mg/L,其他为: X-33/pPICZαA﹥GS115/pPICZαA﹥GS115/pPIC9K﹥GS115/pPIC9﹥SMD1168/pPICZαA﹥SMD1168/pPIC9K﹥SMD1168/pPIC9。比较rhIL-1α、rhIL-1β、rhIL-1Ra等的最佳表达量发现,rhIL-1β的X-33受体/pPICZαA载体的表达量>rhIL-1Ra的表达量>rhIL-1α的表达量。表明:rhIL-1的表达量与载体-受体组合密切相关,其中,X-33/pPICZαA组合表达三种rhIL-1的能力最强,SMD1168/pPIC9组合表达三种rhIL-1的能力最弱。另一方面,rhIL-1的表达量也与IL-1的种类相关,其中,rhIL-1β表达量最高,rhIL-1Ra次之,rhIL-1α的表达量略少于rhIL-1Ra。
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