红心杉组织培养及微扦插繁育技术的研究

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本试验以广西红心杉产地的优良红心杉单株(分别记为Y1和Y2)为组培材料,探索广西种源红心杉无性系的组培快繁技术,研究红心杉无性系外植体启动培养条件及外部因子对红心杉无性系组培苗增殖的影响,筛选红心杉无性系试管苗生根培养基及外源添加物的种类及浓度,优化红心杉无性系组培苗微扦插培养条件,分析红心杉无性系组培各阶段的生理指标与组培效果的关系,主要研究结果如下:1.0.1%升汞6 min及MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L是红心杉较适宜外植体消毒方式及诱导培养基。采用0.1%升汞处理6 min,污染率较低,为35%,且外植体褐化程度较小;以MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L为外植体诱导培养基,外植体萌芽率均为13.33%。随着处理时间的增加,外植体内总酚含量及PPO活性分别增加、降低,Y1的褐化程度较Y2严重,处理时间越长其褐化越严重,Y2的抗褐化能力较Y1好。2.不同红心杉无性系其适宜增殖(继代)培养基不同,应根据不同无性系选择适宜的生长调节剂及其使用浓度;遮光不利于红心杉组培苗叶绿素的积累;有无遮光对其组培苗褐化影响不大;Y2在组织培养方面较Y1优。6-BAO.6mg/L、IBA 0.3 mg/L、KT 1 mg/L及6-BA 0.4 mg/L+IBA 0.1 mg/L+KT 1 mg/L是较适宜Y2增殖(继代)培养的生长调节剂及组合,其增殖倍数最高可达4.60; 6-BA0.2mg/L; IBA 0.3 mg/L、KT 2mg/L及IBA 0.1 mg/L+KT 2 mg/L、3. 6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.1 mg/L+KT 3 mg/L是较适宜Y2增殖(继代)培养的生长调节剂及组合,其增殖倍数最高为2.30;随着遮光时间的延长,两个无性系组培苗叶绿素a、叶绿素b及叶绿素总含量总体表现为逐渐降低;Y2、Y1总酚含量分别在遮光10d、遮光40d下达到最高;在相同的处理下,Y2的平均芽长及茎段增殖倍数均较Y1高。4. 1/4MS+NAA 0.4 mg/L+IBA 0.9 mg/L和IBA 0.5 mg/L+ABT 0.5 mg/L+6-BA 0.6 mg/L是红心杉组培苗较适宜的瓶内生根培养基配方,ABTI#对红心杉组培苗瓶内生根及其叶绿素的积累有一定的促进作用,且在0-1.0mg/L范围内,其浓度越高,其作用越明显。1/4MS+NAA 0.4 mg/L+IBA 0.9mg/L处理下,红心杉生根率及叶绿素总含量最高,分别为78%、1.23 mg/g;当IBA浓度低于6-BA浓度,并适当添加ABT,有利于红心杉组培苗瓶内生根。5.红心杉瓶内生根移栽苗移栽时基质中含有黄心土较利于其生长。以黄心土为基质,红心杉瓶内生根移栽苗的保存率、苗高生长率及叶绿素总含量分别达94%、10.33%、1.48,以黄心土:椰糠:珍珠岩=7:2:1为基质,其保存率及叶绿素总含量略低于黄心土,且显著高于较椰糠:泥炭土=9:1。6. IBA50mg/L+NAA25mg/L的不同浸泡时间处理下,浸泡时间5min较有利于红心杉微扦插苗生根,其生根率为73%,而浸泡时间15min,有利于红心杉苗中叶绿素的积累,其叶绿素含量为1.68 mg/g; IBA 25mg/L是较适宜红心杉微扦插的生长调节剂及浓度,此处理下红心杉微扦插苗木生根率、叶绿素总含量分别为70%、1.16; IBA 50 mg/L+NAA 25 mg/L做生根剂、黄心土做基质较适宜红心杉微扦插;后期管理不宜对苗木追施NAA。
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