TaCAD12和TaPK-R1过量表达转基因小麦的分子特性与功能分析

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小麦是我国的主要粮食作物。小麦纹枯病是由禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)引起的小麦重要土传病害。冻害是影响小麦生长最主要的自然灾害之一。生产上,抗纹枯病、兼抗纹枯病与冻害小麦品种较为匮乏,因此分离克隆抗纹枯、耐冻害相关基因,研究其功能,为抗纹枯病及冻害育种提供理论基础,具有重要意义。本研究通过构建表达载体p20-Rssp2897:6MYC-TaCAD12、pAHC25-MYC-TaPK-R1,用基因枪转化法获得转TaCAD12、TaPK-R1基因小麦。获得以下研究结果:转TaCAD12基因小麦的研究结果:(1)对转TaCAD12基因小麦To-T2代进行PCR以及qRT-PCR分析,获得5个转TaCAD12基因小麦株系。(2)用Western blot分析5个转TaCAD12基因小麦株系中的阳性植株,结果表明这5个转基小麦株系中c-MYC-TaCAD12融合蛋白均被表达。(3)用WK207、R0301分别对转TaCAD12基因小麦T1、T2代进行接种,于收获期进行纹枯病鉴定,结果表明,在转基因小麦中过量表达TaCAD12基因,能提高对不同来源及致病力禾谷丝核菌的抗性。转TaPK-R1基因小麦的研究结果:(1)对转TaPK-Rl基因小麦To-T4代进行PCR、 RT-PCR以及qRT-PCR分析,获得3个转TaPK-R1基因小麦株系。(2)利用Western blot分析3个转TaPK-R1基因小麦株系中的阳性植株,结果表明这3个转基因小麦株系中c-MYC-TaPK-R1融合蛋白均被表达。(3)对T4代转基因小麦及受体进行低温处理,统计存活率、测定脯氨酸和电解质渗漏率含量,结果表明,过量表达TaPK-R1基因提高了转基因小麦对寒冷环境的适应性。(4)用R0301对转TaPK-R1基因小麦T1、T2代进行接种及纹枯病鉴定,用WK207对转TaPK-R1基因小麦T3、T4代进行接种及纹枯病鉴定,抗纹枯病鉴定结果表明,在转基因小麦中过表达TaPK-R1基因,能在不同程度上提高小麦对不同菌株禾谷丝核菌的抗性。(5)经过分子检测与接种抗病鉴定、低温胁迫处理,创制、选育出兼抗纹枯病与冻害的转TaPK-R1基因小麦新种质3份。
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