软骨细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞的作用及机制研究

来源 :中国医学科学院北京协和医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hanbing5
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化是组织工程领域亟待解决的重要问题之一。研究发现,软骨细胞可以促进BMSCs成软骨分化,然而其中的机制尚不明了。外泌体因其可以介导细胞与细胞之间的信息传递,近年来备受关注。而外泌体是否在软骨细胞与BMSCs间发挥信息传递的作用,则需要进一步研究。
  目的:验证软骨细胞来源外泌体是否可以促进BMSCs成软骨分化,并进一步对其中的分子机制进行研究。
  方法:本研究利用超速离心法提取软骨细胞培养基中的外泌体,并从电镜下形态、膜蛋白标志以及粒径大小范围三个方面对外泌体进行鉴定。然后将软骨细胞来源外泌体加入BMSCs培养基中进行共培养,并使用RT-PCR、WB、阿尔新蓝染色等方法对BMSCs成软骨分化的指标进行分析验证。之后进一步对外泌体中包含的miRNA进行分析,并通过荧光素酶报告实验、miRNA模拟物、miRNA抑制物、shRNA等方法对其下游机制进行研究。
  结果:本研究成功分离出软骨细胞来源外泌体,并确定了其促进BMSCs向软骨方向分化的作用。机制研究发现,外泌体中的miR-8485一方面结合GSK3B,抑制GSK-3β表达;另一方面结合DACT1,使GSK-3β的活性降低。通过以上途径增加β-catenin表达,激活下游Wnt/β-catenin通路,从而促进BMSCs向软骨细胞方向分化。
  结论:本研究发现软骨细胞来源外泌体可以促进BMSCs成软骨分化。其中,外泌体中的miR-8485通过调控BMSCs中的GSK-3β,达到促进BMSCs向软骨方向分化的作用。
其他文献
学位
学位
第一部分RhoA在肝细胞癌诊断和预后中的作用  研究背景:本研究旨在探索Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family,member A,RhoA)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者中的mRNA和蛋白表达水平,并探讨RhoA对肝癌的诊断价值和预后意义。  实验方法:基于人类蛋白质图谱(Human Protein Atlas,HPA)
学位
第一部分不同部位的子宫内膜异位症疼痛大鼠模型的脑功能活动分析  目的:子宫内膜异位症(Endometriosis,EM,以下简称内异症)是育龄期女性常见的妇科疾病。疼痛、不孕和盆腔包块是其主要的临床表现和体征,约80%的内异症患者遭受不同程度的疼痛,其疼痛的原因主要是中枢敏化。本研究通过不同部位的内异症大鼠模型进行了高位中枢的脑功能活动分析,探索中枢敏化机制在不同部位子宫内膜异位模型间的差异。  
研究目的  1.探索卵巢卵黄囊瘤基因组学特征,寻找与肿瘤发生相关的驱动基因和与化疗耐药相关的基因标志物。  2.探讨卵巢卵黄囊瘤肿瘤异质性,描绘肿瘤复发转移的演化模式。  3.筛选与卵巢卵黄囊瘤化疗耐药相关的基因,研究其影响肿瘤细胞顺铂敏感性的机制。  研究方法  1.收集41例肿瘤组织和配对外周血行全外显子测序,并对测序数据进行生物信息学分析。根据是否复发以及复发时间间隔,将患者分为化疗敏感组和
学位
背景  复杂区域疼痛综合征(complex regional pain syndrome,CRPS)是一种慢性疼痛综合征,CRPS患者参加日常活动的能力下降,从而受到严重影响。N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptors,NMDARs)拮抗剂被证实对于痛觉过敏有缓解作用,但其在外周的分布及作用尚不清楚。NR2B受体(N-methyl-d-aspa
学位
学位
期刊
学位