【摘 要】
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【目的】本课题旨在探究甲苯胺蓝组织切片染色和Real-time Quantitative PCR（实时荧光定量核酸扩增检测系统,简称qPCR）检测幽门螺杆菌（HP）两种方法结果和程度的一致性;探究HP菌株分型及分析HP菌株分型与胃黏膜活检组织形态（萎缩程度、肠化程度、有无淋巴组织增生、腺上皮瘤变程度）及HP阳性程度的相关性;探究HP阳性患者中克拉霉素耐药位点A2142G、A2143G突变情况,并分
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【目的】本课题旨在探究甲苯胺蓝组织切片染色和Real-time Quantitative PCR（实时荧光定量核酸扩增检测系统,简称qPCR）检测幽门螺杆菌（HP）两种方法结果和程度的一致性;探究HP菌株分型及分析HP菌株分型与胃黏膜活检组织形态（萎缩程度、肠化程度、有无淋巴组织增生、腺上皮瘤变程度）及HP阳性程度的相关性;探究HP阳性患者中克拉霉素耐药位点A2142G、A2143G突变情况,并分析耐药基因突变发生率与患者年龄、性别以及HP阳性程度的相关性。【方法】1、回顾性选取2018年1月---2018年6月在中国人民解放军联勤保障部队第900医院因消化道不适就诊接受胃镜检查患者胃黏膜石蜡切片标本230例。其中经病理诊断为活动性胃炎180例,非活动性胃炎50例,所有患者胃黏膜石蜡切片标本均应用2种方法检测HP:甲苯胺蓝组织切片染色法、实时荧光PCR法。对比两种检测方法,并分析甲苯胺蓝组织切片染色法和实时荧光PCR法两种方法在诊断幽门螺杆菌感染及感染程度的一致性;2、基于qPCR检测的Cag A基因,用于HP阳性样本基因分型,分为I型和II型菌株,统计分析I型菌株和II型菌株与胃黏膜活检HP阳性程度及病理组织形态（萎缩程度、肠化程度、淋巴组织增生、腺上皮瘤变）的相关性;3、通过qPCR检测HP阳性样本克拉霉素耐药位点A2142G、A2143G突变情况,统计分析耐药基因A2142G、A2143G突变发生率与患者年龄、性别以及HP阳性程度的关系。【结果】1、甲苯胺蓝染色法和qPCR染色法检测患者是否感染幽门螺杆菌的一致性较高（Kappa=0.923）,甲苯胺蓝染色法和qPCR染色法检测幽门螺杆菌感染程度的一致性较高（Kappa=0.706）。2、胃黏膜石蜡切片标本中I型菌株中Cag A基因表达水平与胃黏膜活检组织形态萎缩程度、肠化程度具有明显的相关性（P<0.001）,Cag A表达水平随着萎缩程度、肠化程度增加而增加（P<0.05）,与淋巴组织增生具有一定相关性（P=0.014）、表达量随着淋巴组织增生程度增加而增加（P=0.083）,但差异无统计学意义,与腺上皮瘤变无明显相关性（P=0.059）,但表达量随着腺上皮瘤变程度增加而增加（P<0.001）,与HP阳性程度具有明显相关性（P<0.001）,表达量随着HP阳性程度增加而增加（P0.05）,A2142G突变位点与HP阳性程度具有明显相关性（P0.05）,但是表达量在女性中增加（p=0.03）;A2143G突变位点与HP感染程度具有明显相关性（P=0.001）,表达量随着HP阳性程度增加而增加（P=0.002）。【结论】1、与甲苯胺蓝染色法相比较,实时荧光PCR法检测操作简便、不依赖人经验判断,且检测结果无显著差异。2、运用实时荧光PCR法分析胃黏膜样本中表达Cag A基因的表达可鉴定I型HP菌株,且Cag A基因与胃黏膜萎缩程度、肠化程度、HP感染程度、淋巴细胞增生均具有明显的相关性。3、克拉霉素耐药位点中A2142G和A2143G突变与HP感染程度具有明显相关性,且表达量也与HP感染的程度呈正相关的关系。4、实时荧光PCR法在胃黏膜组织中HP感染及组织病理评价方面均具有很大的应用价值。
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