论文部分内容阅读
目的通过裸鼠致瘤实验和临床头颅MRI平扫随访两种方法在动物水平和临床水平初步评价人胎脑源性神经前体细胞致瘤性大小,为神经前体细胞临床移植治疗的安全性提供技术支持。材料与方法选取自愿流产的孕10~14周的人胚胎脑组织,本实验室将其制备成人胎脑源神经前体细胞,取体外传代至不同代数的神经前体细胞(第1、25、40、60代),分别制备成细胞球和单细胞混悬液两种制剂进行裸鼠皮下致瘤检测,并采用293T细胞作为阳性对照。实验共9组,每组5只4~8周龄的BALB/C型裸鼠(购自解放军军事医学科学院实验动物中心),每只裸鼠皮下注射1×107个细胞。细胞接种后饲养6个月,每天观察裸鼠的精神状态、整体外观、饮食、排便以及接种局部有无出现结节或肿块等异常情况,接种6个月后处死裸鼠,对接种局部的皮肤、皮下组织及肝、脾、心、肾等肿瘤易转移的部位进行组织病理切片并HE染色,并请病理学专家阅片,观察是否出现肿瘤形成。在2007年10月-2011年12月期间于海军总医院儿科接受神经前体细胞脑内移植的约520例患儿中,采用随机数表法进行随机抽样,抽取80例患儿进行随访头颅MRI平扫检查,要求头颅MRI平扫检查时间距神经前体细胞移植治疗时间2年以上,请医学影像学专家对所有头颅MRI平扫胶片结果进行阅片,观察有无脑肿瘤形成。结果阳性对照组裸鼠接种293T细胞后精神及饮食无明显异常。20天后接种部位即可触及质韧的小结节,并且结节的体积逐渐增大,接种60天后5只裸鼠的接种局部均可见明显的肿块,质硬,活动度差,类圆形,直径约1.5~2.5cm。180天后将裸鼠处死,解剖取出肿块,经病理切片及HE染色后证实肿块确是肿瘤。各组裸鼠接种hNSCs后均能存活至90天以上,90天后各组裸鼠除有1~2只病死外,均有3只以上存活至180天。具体死因尚不明确,推测感染可能性大。病死的裸鼠死前数日出现精神萎靡,饮食减少。余各组裸鼠精神、饮食及大便性状均无明显异常。各组裸鼠接种神经前体细胞后接种局部未见肿块或结节形成。对饲育过程中病死的裸鼠及时取回,对存活至180天的裸鼠进行处死,对病死及处死的裸鼠进行解剖,取出接种局部的组织及肝脏、脾脏、心脏、肾脏进行固定,并组织病理切片和HE染色,病理学专家阅片后未发现肿瘤形成。对随机抽取的80例在我科接受神经前体细胞脑内移植的患儿进行头颅MRI平扫检查,请医学影像学专家阅读头颅MRI平扫胶片后未发现致瘤情况。结论不同代数的人胎脑源性神经前体细胞细胞球及单细胞悬液在裸鼠体内致瘤实验中未发现肿瘤形成。对随机抽取的80例接受神经前体细胞移植的患儿进行头颅MRI平扫检查未发现肿瘤形成。从致瘤性方面初步证实了本实验室所培养的人胎脑源神经前体细胞没有发生恶性转化,没有致瘤性,支持其用于临床移植治疗具有安全性。但是本实验每组的细胞只接种了5只裸鼠,需要更大的样本量才能更充分证明体外培养的人胎脑源神经前体细胞没有裸鼠致瘤性,不能说明人胎脑源神经前体细胞用于临床细胞移植治疗绝对安全,大规模的临床实验仍需要继续研究探索。