吊兰Ccfaldh基因对大岩桐和紫罗兰的遗传转化

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甲醛(HCHO)是室内空气中的主要污染物之一,引起了全球的关注。接触甲醛可能会导致鼻咽癌和白血病。本研究利用基因工程手段,通过农杆菌介导的遗传转化法将吊兰中的甲醛脱氢酶(Ccfaldh)基因转入花卉植物中,以改善花卉吸收代谢甲醛的能力。主要研究内容如下:1.大岩桐组织培养体系的建立以大岩桐的叶片为外植体,研究不同培养基对叶片不定芽的诱导,增殖,以及再生植株生根的影响。结果表明:叶片不定芽诱导与增殖的最适培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA;再生植株生根的最适培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA。2.紫罗兰组织培养体系的建立以紫罗兰的叶片为外植体,研究了不同培养基对叶片不定芽的诱导,增殖,以及再生植株生根的影响。结果表明:叶片不定芽诱导的最适培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA,不定芽增殖最适的培养基为MS+1.0mg/L6-BA,再生植株生根最适的培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA。3.农杆菌介导的大岩桐和紫罗兰的遗传转化大岩桐叶片的转化:对叶片进行预培养2天,培养基中添加100μmol/L的乙酰丁香酮,在黑暗条件下培养。菌液浓度达到OD600=0.5-0.6之间时侵染6min。在黑暗条件下,培养基中添加100μmol/L的乙酰丁香酮,共培养3天。转入筛选培养基中,卡那霉素的筛选浓度为150mg/L,抑菌剂头孢霉素(Cef)浓度为500mg/L,生根阶段的卡那霉素筛选浓度为150mg/L。添加乙酰丁香酮(AS)可提高遗传转化的效率。紫罗兰叶片的转化体系:对叶片进行预培养2天,培养基中添加100μmol/L的乙酰丁香酮,在黑暗条件下培养。菌液浓度达到OD600=0.5-0.6之间时侵染10min。在黑暗条件下,培养基中添加100μmol/L的乙酰丁香酮,共培养3天。转入筛选培养基中,卡那霉素的筛选浓度为200mg/L,抑菌剂头孢霉素(Cef)浓度为500mg/L,生根阶段的卡那霉素筛选浓度为250mg/L。添加乙酰丁香酮(AS)可提高遗传转化的效率。4.转Ccfaldh基因阳性植株的分子生物学检测利用PCR初步检测得到21株大岩桐的阳性植株。实时定量PCR结果显示,大岩桐株系6的Ccfaldh基因相对表达量较高。通过甲醛吸收能力的分析,大岩桐株系6的甲醛吸收能力最高。
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