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大肠癌组织中ERCC1、TS、EGFR表达及临床意义前言组织芯片是将多个细小组织片按预先设计或研究需要整齐排列于同一载体而成的组织微阵列，具有体积小、信息含量高的特点。适于免疫组织化学和DNA、RNA杂交，能大大提高实验效率，且所得结果均一可靠、可比性强。近年来，组织芯片技术广泛应用于临床肿瘤诊断和研究领域。大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，严重威胁人民健康。大肠癌治疗采用手术、放化疗、分子靶向治疗等相结合的综合治疗，多药耐药(MDR)是影响化疗效果的重要因素。FOLFOX方案是常用的国际标准化疗方案，但化疗有效率仅为25％，耐药率较高。有研究报道，西妥昔单抗(C225)联合FOLFOX4大大提高了化疗有效率并逆转了耐药，为大肠癌治疗带来新的希望。胸苷酸合成酶(TS)、切除修复交叉互补基因(ERCCl)分别为标志氟尿嘧啶(5-Fu)、奥沙利铂(L-OHP)耐药的指标，表皮生长因子受体(EGFR)为C225的靶向分子，三者共同在大肠癌耐药中的作用机制尚不清楚，相关研究较少，而三者与临床病理特征关系的研究国内外均未见报道。且目前临床用药多以经验为主，较有价值的耐药和预后指标的联合检测仍较少，已成为临床工作中急待解决的问题。本研究拟采取组织芯片技术及免疫组化SP方法，检测大肠中的ERCC1、EGFR、TS表达，探讨其与临床病理特征的关系及意义。材料和方法1、病例和标本收集中国医科大学附属第一医院及辽宁省肿瘤医院2005年4月～2006年7月间手术切除的结直肠癌组织石蜡标本133例，患者术前均未接受放疗和化疗。其中男76例，女57例，年龄31-81岁，平均55.4岁。病理均为腺癌。取16例正常大肠组织作为对照。2、试剂ERCC1鼠抗人单克隆抗体购自NeoMarkers公司，TS鼠抗人单克隆抗体及EGFR鼠抗人单克隆抗体、SP检测试剂盒及DAB显色液，均购自福州迈新生物技术有限公司。3、方法应用组织芯片技术、免疫组化SP法，按照SP检测试剂盒说明书所示步骤进行，ERCC1经柠檬酸缓冲液(PH=6.0)微波抗原修复，EGFR经胃蛋白酶抗原修复，TS无需抗原修复。组织芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。4、结果判定ERCC1以胞核及胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性染色，TS、EGFR以胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性染色，随机选取5个高倍视野(400×)计数阳性细胞百分数，阳性细胞数百分率≤10％记作阴性(－)，＞10％记作阳性(＋)。5、统计分析方法采用SPSS11.5统计软件，卡方检验及Spearman秩相关分析，采用双侧检验，P＜0.05为具有统计学意义。实验结果1、ERCC1在大肠癌及正常大肠组织中的表达ERCC1在结直肠癌中表达阳性率为71.4％，在正常大肠组织阳性率为37.5％。ERCC1在大肠癌中表达显著高于正常大肠组织(P=0.006)。2、TS在大肠癌及正常大肠组织中的表达TS在大肠癌中表达阳性率为58.6％，正常大肠组织不表达TS蛋白。3、EGFR在大肠癌及正常大肠组织中的表达EGFR在大肠癌中表达阳性率为59.4％，正常大肠组织亦表达EGFR，其阳性率为18.75％。EGFR在大肠癌中表达显著高于正常大肠组织(P=0.002)。4、ERCC1、TS、EGFR表达与患者一般状况及大肠癌临床病理特征的关系ERCC1在高中分化腺癌中的表达显著高于低分化腺癌(P=O.025)，ERCC1表达与性别、年龄、浸润深度、部位、有无淋巴结转移及临床分期无关(P＞0.05)。TS及EGFR在有淋巴结转移和临床分期为Ⅲ、Ⅳ期患者中表达显著高于无淋巴结转移和临床分期为Ⅰ、Ⅱ期者(P＜0.05)，与性别、年龄、部位、浸润深度及组织分化程度无关(P＞0.05)。5、ERCC1、TS、EGFR表达的相关性ERCC1与TS表达之间存在正相关，(r=0.217，P=0.012)，TS与EGFR及ERCC1与EGFR之间无相关性(P＞0.05)。结论1、大肠癌组织中，ERCC1及EGFR表达较正常组织显著升高。ERCC1表达与组织病理分化程度有关，TS及EGFR表达均与有无淋巴结转移和临床分期有关，三者均与性别、年龄、部位及浸润深度无关。2、ERCC1与TS的表达成正相关。