表面活性剂与碳酸酐酶的相互作用对酶催化活性的影响

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碳酸酐酶(CA)是能够加速二氧化碳向碳酸根离子转化的生物类催化剂,在环境保护方面具有重要意义。保持CA的活性和稳定性是该研究领域面临的关键挑战之一。已有研究表明,使用小分子表面活性剂作为添加剂,能够调控酶的催化活性和稳定性。本论文采用等温滴定量热(ITC)、紫外可见光谱(UV-vis)、微量溶解量热等方法,主要研究了传统的阳离子表面活性剂、gemini阳离子表面活性剂和两性离子表面活性剂与CA之间的相互作用,并以p-PNA和CO2为底物初步研究了CA在表面活性剂作用下的活性。主要研究内容如下:1.用ITC研究表面活性剂与CA之间的相互作用采用ITC研究了表面活性剂与CA之间的相互作用。实验结果表明,表面活性剂分子与CA之间的相互作用的热力学特性与表面活性剂分子极性头基的电荷性质有关。带正电荷的阳离子型表面活性剂(TTAB)与CA分子上带负电荷的氨基酸残基发生特定位点的相互作用,进而在酶表面形成分子簇、胶束,对酶活性产生一定影响。两性离子表面活性剂SB3-12和CB1-14与CA分子之间的相互作用相对较弱。2.用紫外可见光谱法研究表面活性剂对CA活性的影响通过UV-vis测量了在表面活性剂作用下CA催化p-PNA的水解反应的活性,以表征表面活性剂对酶活性的影响。结果表明阳离子、gemini阳离子和两性离子表面活性剂在各自低浓度区域(cmc之前)均存在较高的CA活性,相对活性达到约90%。CA在gemini阳离子表面活性剂12-s-12和传统阳离子表面活性剂DTAB、TTAB体系中与在两性离子表面活性剂SB3-12、CB1-14体系中相比表现出了更高的催化活性。CB1-14和SB3-12对CA的活性没有显著影响,对酶的天然结构具有一定的保护作用,能够提高CA的动力学稳定性。3.用微溶解量热方法研究表面活性剂对CA催化CO2水合反应的影响采用微溶解量热法研究了表面活性剂胶束对CA催化CO2水合反应的影响,通过观测焓随CO2溶解过程的变化比较CA的催化速率。CA可以催化CO2水合反应的发生但不能改变CO2的溶解吸收量,从CO2在PCB、CA-PCB、表面活性剂(TTAB、SB3-12、CB1-14)胶束-PCB和含有表面活性剂胶束的CA-PCB溶液中的溶解吸收微量热曲线及观测焓值的比较,得到表面活性剂胶束本身并不影响CO2的水合反应过程的结论。阳离子TTAB对CA催化CO2水合反应的性能产生了负影响,而两性离子SB3-12和CB1-14胶束对CA的催化性能影响不明显。
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