白耙齿菌和黑孢菌共培养次生代谢产物及活性研究

来源 :云南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cexo0924
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由于内生真菌独特的生物结构和所生长的环境的特殊性,所以能代谢多种具有生物活性的物质,而且这些物质可以用于治疗疾病和防植物病害。而石斛属Dendrobium植物本身就是药材,并且具有多种活性物质。因此由石斛的内生真菌也能产生具有生物活性的化合物。本论文研究了从紫皮石斛Dendrobium devonianum中分离得到白耙齿菌(Irpex lacteus)和铁皮石斛Dendrobium officinalis中分离得到黑孢菌(Nigrospora oryzae)共培养的次级代谢产物及生物活性。本论文分为四章:第一章综述了石斛属Dendrobium植物的生物活性成分研究进展;石斛属Dendrobium植物的内生真菌活性代谢产物研究进展;植物内生菌混菌共培养的代谢产物化学多样性研究进展。第二章从采自云南文山铁皮石斛Dendrobium officinalis和紫皮石斛Dendrobium devonianum的根、茎、叶种子共分离得到植物内生真菌150株。对这150株菌进行初筛得到化学多样性好的37株菌,再对这37株菌进行复筛:黑孢菌(Nigrospora oryzae)TPY 10-1作为公共菌株,分别与37株菌进行共培养,筛选出菌株ZPY 45-2与黑孢菌(Nigrospora oryzae)TPY 10-1混合培养的次级代谢产物化学多样性好。菌株ZPY 45-2分离自紫皮石斛Dendrobium devonianum叶子,通过ITS序列测定鉴定为白耙齿菌(Irpex lacteus)。第三章对黑孢菌(Nigrospora oryzae)TPY 10-1和白耙齿菌(Irpex lacteus)ZPY 45-2进行液体PDB混合培养,从其培养液及菌丝体中分离鉴定出14个化合物,包括5个新化合物:nigrosirpexin B(1*),nigrosirpexin C(2*),nigirpexin E(3*),nigrosirpexin D(4*),nigrosirpexin E(5*).9个已知化合物:3S,4R-(+)-4-hydroxymellein(6),6-hydroxymellein(7),onocenolide A(8),conocenolide B(9),12-epoxy-5,6-secotremula-1,6(13)-dien-5,12-olide(10),11-acetoxy-5,6-seco-1,6(13)-tremuladien-5,12-olide(11),12-acetoxy-5,6-seco-1,6(13)-tremuladien-5,11-olide(12),11,12-dihydroxy-1-tremulen-5-one(13),conocenolide B(14)。对部分化合物进行指定菌的抗菌实验。化合物1*、4*、5*、6、8、12对内生真菌Nigrospora oryzae有抗菌活性,1*、6、8的MICs值都是<1μg/mL,4*的MIC值16μg/mL,5*的MIC值4μg/mL,12的MIC值32μg/mL。化合物4*对非同源内生真菌Irpex lacteus有抗菌活性,MIC值<1μg/mL。化合物4*、10、11对共培养内生真菌N.oryzae,I.lacteus有抗菌活性,它们的MICs值分别为2μg/mL,64μg/mL,64μg/mL。第四章以铁皮石斛Dendrobium officinalis为固体培养基对白耙齿菌Irpex lacteus ZPY 45-2和黑孢菌Nigrospora oryzae TPZ 10-1进行混合发酵的研究。通过多种色谱分离手段和多种光谱从其固体培养物中分离鉴定5个化合物,包括1个新化合物nigrosirpexin F(1*)和4个已知化合物11,12-epoxy-5,6-secotremula-1,6(13)-dien-5,12-olide(2),11,12-epoxy–12β-hydroxy-1-tremulen-5-one(3),(+)-丁香脂素(4),β-sitosterol-3-O-heptadeca-8Z,11Z-dienoate(5)。对部分化合物进行抗菌实验,实验结果表明化合物1*对Nigrospora oryzae有抗菌活性,MIC值为64μg/mL,对Irpex lacteus有抗菌活性,MIC值为8μg/mL,对共培养N.oryzae及I.lacteus有抗菌活性,MIC值分别为8μg/mL。化合物2对共培养内生真菌N.oryzae,I.lacteus有抗菌活性,MIC值为64μg/mL。化合物4对内生真菌Nigrospora oryzae有抗菌活性,MIC值为16μg/mL,对共培养内生真菌N.oryzae,I.lacteus有抗菌活性,MIC值为32μg/mL。
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