我国拥有丰富的畜禽遗传资源,畜禽遗传资源的保护和利用是国家种业创新,保护生物多样性、农业安全和生态安全的重要保证。在动物体细胞克隆技术不断发展和成熟的情况下,体细胞遗传资源保护和利用受到越来越多的关注。体细胞遗传资源的保护和利用对于优良家畜的扩繁、育种以及濒危动物的挽救和种质资源的保护都具有重要意义。亚精胺(Spermidine)是一种广泛分布于生物体内的多胺化合物,参与调控细胞生长和增殖、组织再生、DNA和RNA稳定、酶促调节反应、翻译调节、抗氧化、抗炎和自噬等多种生物学过程,其可通过诱导自噬基因相关转录物的显著上调,从而增强细胞自噬作用,改善细胞老化状态,延长生物体的寿命。本研究对萨能奶山羊耳缘皮肤组织进行体细胞分离和培养,利用亚精胺处理分离培养的奶山羊成纤维细胞,进行体细胞抗衰老方面的研究,旨在为奶山羊遗传资源的保护和利用提供技术积累和支撑。研究结果如下:1.试验使用组织块贴壁法成功分离培养奶山羊成纤维细胞并根据细胞传代时不同细胞胰蛋白酶敏感性的不同进行了细胞纯化。使用免疫荧光染色对纯化后的细胞进行成纤维细胞特异性标记物Vimentin的检测,结果显示细胞Vimentin呈阳性且纯度达到98.3%。通过上述试验成功获得了高纯度的奶山羊成纤维细胞。随后对奶山羊成纤维细胞进行了生物学特性研究,包括细胞生长曲线绘制、核型分析、微生物污染检测。使用细胞计数法绘制的细胞生长曲线呈“S”型,最大细胞增殖数目为1.33×10~5,观察细胞生长状况良好;核型分析结果显示染色体数目为2n=60,包括29对常染色体和1对性染色体,性染色体为XY型;微生物污染检测结果表明细胞未受到细菌、真菌及支原体污染。不同代数的成纤维细胞形态观察结果发现,随着传代次数的增加,细胞生长状态变差,细胞形态变得扁平且体积增大,老化现象明显。上述试验结果表明分离培养的奶山羊成纤维细胞状态良好且稳定可用于后续的利用,但随着传代次数的增加出现了细胞老化现象。2.对分离培养获得的奶山羊成纤维细胞,进行传代培养和D-Gal诱导衰老,分别设置P5(传代5代)、P13(传代13代)自然衰老组和D-Gal诱导衰老组3个组,以亚精胺处理P5和P13组细胞,分别处理24h和48h,并对培养的各组细胞进行细胞老化水平的检测,包括细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)阳性染色率、端粒长度、衰老相关基因p21、p53mRNA表达水平、活性氧水平、周期G0/G1期比例和衰老相关分泌表型(SASP)。结果显示亚精胺处理组细胞的SA-β-Gal阳性染色率、衰老相关基因p21、p53mRNA表达水平、活性氧水平、周期G0/G1期比例、衰老相关分泌表型较对照组显著降低,端粒长度较对照组显著升高。表明亚精胺处理改善了奶山羊成纤维细胞的老化状态。本研究成功分离培养了萨能奶山羊耳缘成纤维细胞,并通过亚精胺处理延缓了细胞的衰老,有利于萨能奶山羊体细胞遗传资源的保护和利用。