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为了比较雌雄异株植物的化学成分和抗氧化活性的差异,以毛白杨（Populus tomentosa Carrière）花蕾和银杏（Ginkgo biloba L.）树皮为研究对象,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）建立HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统,标定共有峰,并进行相似度评价;基于共有峰,采用SIMCA 14.1软件进行多元统计分析,包括主成分分析（PCA）、聚类分析（HCA）和正交偏最小二乘-判别分析（OPLS-DA）,鉴别样品的雌雄,并筛选差异成分;采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF/MS）鉴定雌雄样品的差异成分。以儿茶素为对照,采用亚硝酸钠-硝酸铝显色法测定总黄酮含量;以6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸（Trolox）为阳性对照,采用1,1-二苯基-2-（2,4,6-三硝基苯基）肼（DPPH）和2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基清除法测定体外抗氧化活性;采用独立样本t检验分析方法进行雌雄样品之间的比较。具体研究结果如下:1雌雄毛白杨HPLC指纹图谱和抗氧化活性的比较1.1 HPLC指纹图谱及多元统计分析运用HPLC建立22份毛白杨花蕾的指纹图谱,共标定出17个共有峰,与对照品比较,其中4、5和12号峰分别是siebolside B、异大齿杨苷A和樱花素。11份雌花蕾的相似度在0.978～0.999之间,11份雄花蕾在0.943～0.985之间。基于17个共有峰的峰面积,运用SIMCA 14.1软件的PCA、HCA和OPLS-DA分析方法对22份毛白杨花蕾进行多元统计分析。在无监督模式下,PCA结果显示雌花蕾和雄花蕾之间沿着纵轴明显地分为两组（R2X=0.753,Q2=0.564）。HCA树状图显示雌花蕾位于左侧,雄花蕾位于右侧,两者得到明显的区分。在有监督模式下,OPLS-DA结果显示雌雄花蕾沿着纵轴明显地分开（R2Y=0.980,Q2=0.970）。通过200次置换检验,结果显示OPLS-DA模型并未出现过度拟合的现象。根据S-plot图（|p[1]|≥0.2,|p（corr）[1]|≥0.8）、变量载荷评价参数值（VIP）（VIP＞1）和P＜0.05筛选出四个差异色谱峰,分别为4、9、14和15号峰。通过UPLC-Q-TOF/MS对差异成分进行鉴定,结合对照品和文献,鉴定出两个化合物,分别为siebolside B和特里杨苷。由此可以认为,siebolside B和特里杨苷可能是毛白杨花蕾中潜在的性别标志物。1.2总黄酮含量的测定以儿茶素为对照,采用亚硝酸钠-硝酸铝显色法测定22份毛白杨雌雄花蕾的总黄酮含量,结果显示,11份毛白杨雌花蕾的总黄酮含量为24.30～27.56 mg/g,1 1 份雄花蕾的含量为 25.54～31.99 mg/g。运用 IBM SPSS Statistics 25 软件分析及比较雌雄花蕾的总黄酮含量,结果显示雌雄花蕾的总黄酮含量具有显著性差异（P＜0.05）,而且雄花蕾的含量高于雌花蕾,说明毛白杨花蕾的总黄酮含量与性别有关。1.3抗氧化活性的评价以Trolox为阳性对照,采用DPPH和ABTS自由基清除法评价及比较毛白杨雌雄花蕾的体外抗氧化活性,结果显示,毛白杨雌、雄花蕾DPPH法的Trolox-Equivalent Antioxidant Capacity（TEAC）值分别为 15.62～24.22 mmol/L和20.13～29.03 mmol/L,毛白杨雌、雄花蕾ABTS法的TEAC值分别为19.08～21.61 mmol/L 和 20.90～26.34 mmol/L。运用 IBM SPSS Statistics 25 软件分析比较雌雄花蕾的体外抗氧化活性,结果显示这2种方法的TEAC值在雌雄花蕾之间均具有显著性差异（P＜0.05）,雄花蕾DPPH法和ABTS法的TEAC值均大于雌花蕾。TEAC值越大,对DPPH和ABTS自由基的清除能力越强,抗氧化能力越强,即雄花蕾的抗氧化活性高于雌花蕾。运用IBM SPSS Statistics 25软件,将22份毛白杨雌雄花蕾的总黄酮含量与其对应的DPPH和ABTS法所测定的TEAC值分别进行相关性分析,结果显示,总黄酮与DPPH法和ABTS法的TEAC值的相关系数分别为0.605和0.896,2种方法测定的TEAC值均与总黄酮含量呈正相关,说明毛白杨花蕾的抗氧化活性与其总黄酮含量呈正相关。2雌雄银杏HPLC指纹图谱和抗氧化活性的比较2.1 HPLC指纹图谱及多元统计分析运用HPLC建立10份银杏雌雄树皮的指纹图谱,共标定出9个共有峰。5份雌树皮的相似度在0.981～0.993之间,5份雄树皮在0.955～0.992之间。基于9个共有峰的峰面积,运用SIMCA 14.1软件的PCA、HCA和OPLS-DA分析方法对10份银杏雌雄树皮进行多元统计分析。在无监督模式下,PCA结果显示雌树皮和雄树皮明显地分为两组（R2X=0.779,Q2=0.674）。HCA树状图显示雌树皮位于左侧,雄树皮位于右侧,两者明显地区分开。在有监督模式下,OPLS-DA结果显示雌雄树皮沿着纵轴明显地分开（R2Y=0.951,Q2=0.900）。通过200次置换检验,结果显示OPLS-DA模型并未出现过度拟合的现象。根据 S-plot 图（|p[1]|≥0.4,|p（corr）[1]|≥0.6）、VIP 值（VIP＞1）和 P＜0.05 筛选出三个差异色谱峰,分别为4、6和8号峰。通过UPLC-Q-TOF/MS对差异成分进行鉴定,结合文献,共鉴定出三个化合物,分别为番石榴酸、橄榄树脂素4,4’-双-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和橄榄树脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。由此可以认为,这三个化合物可能是银杏的潜在性别标志物。2.2总黄酮含量的测定以儿茶素为对照,采用亚硝酸钠-硝酸铝显色法测定10份银杏雌雄树皮的总黄酮含量,结果显示,银杏雌树皮的总黄酮含量为4.72～5.35 mg/g,雄树皮的含量为5.86～8.94 mg/g。运用IBM SPSS Statistics 25软件分析比较雌雄树皮的总黄酮含量,结果显示雌雄树皮的总黄酮含量具有显著性差异（P＜0.05）,而且雄树皮的含量高于雌树皮,说明银杏的总黄酮含量与性别有关。2.3抗氧化活性的评价以Trolox为阳性对照,采用DPPH和ABTS自由基清除法评价及比较银杏雌雄树皮的体外抗氧化活性,结果显示,银杏雌、雄树皮DPPH法的TEAC值分别为2.08～3.92 mmol/L和4.11～8.69 mmol/L,银杏雌、雄树皮ABTS法的TEAC 值分别为 3.28～5.46 mmol/L 和 6.35～9.63 mmol/L。运用 IBM SPSS Statistics 25软件分析比较雌雄样品的体外抗氧化活性,结果显示这2种方法的TEAC值在雌雄树皮之间均具有显著性差异（P＜0.05）,雄树皮DPPH法和ABTS法的TEAC值均大于雌树皮,TEAC值越大,对DPPH和ABTS自由基的清除能力越强,抗氧化能力越强,即雄树皮的抗氧化活性高于雌树皮。运用IBM SPSS Statistics 25软件,将10份银杏雌雄树皮的总黄酮含量与其对应的DPPH和ABTS法所测定的TEAC值分别进行相关性分析,结果显示。总黄酮与DPPH法和ABTS法的TEAC值的相关系数分别为0.801和0.920,2种方法测定的TEAC值均与总黄酮含量呈正相关,说明银杏树皮的抗氧化活性与其总黄酮含量呈正相关。3结论毛白杨雌雄花蕾的化学成分存在差异,HPLC指纹图谱结合多元统计分析方法可用于鉴别毛白杨的雌雄;毛白杨雄花蕾的总黄酮含量和抗氧化活性高于雌花蕾,雌雄花蕾具有显著性差异,可能是选择雄花序入药的原因;银杏雌雄树皮的化学成分存在差异,HPLC指纹图谱结合多元统计分析方法可用于鉴别银杏的雌雄;银杏雄树皮的总黄酮含量和抗氧化活性高于雌树皮,雌雄树皮具有显著性差异,可以在实际应用中加大对银杏雄株树皮的开发和利用。本研究首次采用HPLC指纹图谱结合多元统计分析方法鉴别银杏的雌雄,首次对毛白杨花蕾和银杏树皮进行了总黄酮含量及抗氧化活性的测定,并进行相关性分析,丰富了雌雄异株植物的性别差异的物质基础内涵,为毛白杨和银杏进一步的开发和利用提供参考依据。