流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE,简称乙脑）和狂犬病（Rabies）都是以动物为媒介传播的人畜共患急性传染病,均属于我国法定乙类传染病。乙脑的病死率和致残率高,主要在亚洲广大地区流行。我国是乙脑高发区,自接种乙脑疫苗后,发病率有明显下降,但局部地区时有暴发或流行。狂犬病是由狂犬病病毒感染所引起,被带毒动物咬伤后如不进行及时治疗而一旦发病,死亡率极高。近年来随着各地养狗数量增多,狂犬病病例有增多的趋势。目前狂犬病疫苗是唯一可有效控制狂犬病的制剂。评价抗病毒感染疫苗的免疫效果应包括B细胞介导的体液免疫和T细胞介导的细胞免疫应答两部分。然而,长期以来评价乙脑疫苗和狂犬病疫苗免疫效果的优劣一直以体液免疫为主,常以检测接种人群或免疫动物的血清中和抗体效价为决定性指标,未建立有效评价细胞免疫效果的方法。本课题采用ELISPOT技术结合抗体亚型分析对乙脑疫苗和狂犬病疫苗的细胞免疫应答进行了研究,并结合免疫后血清中和抗体水平和小鼠攻击实验观察疫苗对动物的保护效果,对其细胞免疫机制进行探讨。课题第一部分通过对乙脑减毒活疫苗和灭活疫苗的细胞免疫应答的比较,阐述了乙脑疫苗的免疫机理。结果显示,与乙脑灭活疫苗相比乙脑减毒活疫苗免疫小鼠可产生更多的IFN-γSFC和IL-2 SFC,原倍乙脑减毒活疫苗可同时诱导IgG2a和IgG1抗体,而乙脑灭活纯化疫苗免疫小鼠后只产生极少量的IFN-γSFC和IL-2SFC,并只能诱导IgG1抗体。提示活病毒抗原能同时诱导细胞免疫反应和体液免疫反应在体内达到平衡,而灭活疫苗主要诱导体液免疫反应。研究还发现乙脑减毒活疫苗对小鼠的保护效果优于乙脑灭活疫苗。而乙脑减毒活疫苗稀释至10^-3时体液免疫水平较低,但细胞免疫水平较强,仍能保护90%的小鼠免受致死剂量乙脑病毒的攻击,略高于乙脑灭活疫苗未稀释原液免疫的保护效果（80%）。提示不论是体液免疫还是细胞免疫,均在保护小鼠免受致死剂量的乙脑病毒攻击、延缓乙脑发病死亡时间上发挥着重要作用,两者相互平衡时才能达到最佳的免疫效果。乙脑减毒活疫苗免后14天细胞免疫水平达到高峰,以后逐渐下降,免后3个月至1年间的脾细胞IFN-γSFC和IL-2 SFC数量仍维持在一定水平上,并较阴性对照组小鼠高。小鼠中和抗体水平在3个月内由1∶20增加到1∶80,一年内仍维持在1∶40。结果显示1年内乙脑减毒活疫苗免疫的小鼠均能很好地抵御乙脑强毒株的腹腔攻击。提示乙脑减毒活疫苗能够在体内进行复制,温和地持续诱导机体细胞免疫和体液免疫应答,特别是细胞免疫应答,产生并保留了较多记忆细胞。因此乙脑减毒活疫苗免疫一针即能产生长期的保护效果。课题第二部分研究了皮卡佐剂对狂犬病疫苗免疫应答的影响。ELISPOT结果显示PIKA佐剂狂犬病疫苗在免后7天和14天的IFN-γSFC水平均较高,明显优于所检测的其他狂犬病疫苗。可能因为PIKA为一种dsRNA型佐剂,其在体内与免疫系统相互作用是通过Toll样受体3（TLR3）识别,产生类似病毒感染的免疫反应,可诱导细胞免疫和体液免疫反应。而传统的狂犬病疫苗均为灭活疫苗,抗原在体内主要由MHCⅡ类分子提呈,诱导产生抗体。皮卡佐剂狂犬病疫苗免后7天的血清中和抗体效价没有免疫地鼠肾细胞狂犬病疫苗高,但细胞免疫效果明显优于地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗,保护效果也较好,提示皮卡佐剂狂犬病疫苗早期的细胞免疫作用可能在保护小鼠免受致死剂量病毒攻击中起重要作用。研究还发现无论免疫一针还是两针,皮卡佐剂狂犬病疫苗均较地鼠肾细胞狂犬病疫苗保护高,而与Vero细胞狂犬病疫苗接近或略高,但皮卡佐剂狂犬病疫苗为皮卡佐剂与地鼠肾细胞狂犬病疫苗按4∶1的比例复合而成,抗原用量约相当于其他三种狂犬病疫苗的五分之一,提示PIKA作为佐剂与狂犬病疫苗混合,可减少抗原用量,增强细胞免疫应答和体液免疫应答。本课题对乙脑减毒活疫苗和狂犬病疫苗细胞免疫机理进行了研究,分析比较了乙脑减毒活疫苗与灭活疫苗中细胞免疫应答的差异,以及皮卡佐剂狂犬病疫苗与传统狂犬病疫苗细胞免疫应答的差异。结果表明:乙脑减毒活疫苗和狂犬病疫苗诱导的细胞免疫反应均可对机体产生重要的保护作用;乙脑减毒活疫苗细胞免疫效果优于灭活疫苗;皮卡佐剂狂犬病疫苗细胞免疫效果优于传统狂犬病疫苗。