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第一部分外周血B细胞及调节性B细胞与结肠癌的关系目的:分析调节性B细胞量与结肠癌临床分期的关系及对结肠癌复发的风险预测作用。方法:采用流式细胞仪技术分析结肠癌患者外周血中CD19+B细胞、CD19+IL-10+B细胞的数量,并分析了 CD19+IL-10+B细胞的数量与结肠癌临床资料的关系。通过随访24个月结肠癌临床复发情况,结合患者外周血CD19+IL-10+B细胞的数量,应用Kaplan-Meier生存分析比较术后复发与CD19+IL-10+B细胞数量之间的关系,并应用Cox模型进行多因素分析,筛选复发的预测因子。结果:1.结肠癌患者与健康人外周血中CD19+B细胞占淋巴细胞百分比无显著性差异7.76%VS 6.92%（P=0.240）。2.CD19+IL-10+B细胞占CD19+B细胞的百分比显著高于健康人4.28%VS 0.98%（P=0.004）,且其数量与结肠癌分期呈正相关（P<0.05）。3.COX比例风险模型因素分析,发现CD19+IL-10+B细胞数量是结肠癌患者复发的独立预测因子（风险系数OR为2.159,95%的可信区间0.272-17.130）。结论:结肠癌外周血中调节性B细胞百分比较正常人显著升高,并且与结肠癌的TNM分期有关,其水平对结肠癌的复发可能具有预测作用。第二部分结肠癌患者体内调节性B细胞与CD40L的关系目的:探讨CD40L与调节性B细胞在结肠癌患者体内的相关性。方法:通过ELISA试剂盒检测结肠癌患者血清sCD40L的水平,并与其CD19+IL-10+B细胞的数量进行相关性分析;通过免疫组化方法检测结肠癌组织中CD40L,流式细胞仪检测其癌旁组织中CD19+IL-10+B细胞的量,进行相关性分析。结果:1.结肠癌患者血清sCD40L为2.318±1.201ng/ml,正常健康人血清sCD40L为1.622±0.680ng/ml,两组间数据比较具有统计学差异（P=0.027）。结肠癌患者血清sCD40L的水平与其外周血CD19+IL-10+B细胞的数量有显著相关性,Spearman系数为0.763,P<0.01。2.CD19+IL-10+B表达于癌旁组织中:结肠癌组织CD40L 阳性表达的患者,其癌旁组织中CD19+IL-10+B细胞的百分比为6.33%;CD40L阴性表达者,其癌旁组织中CD19+IL-10+B细胞的百分比为2.38%,两组具有统计学意义（P<0.01）。结论:结肠癌患者外周血中,可溶性CD40L的含量与调节性B细胞的比例呈正相关;结肠癌组织中CD40L表达阳性者其癌旁组织中调节性B细胞量较CD40L阴性者显著增多,提示CD40L与调节性B细胞在结肠癌微环境中的可能存在一定的关联。第三部分调节性B细胞的功能与CD40的关系目的:探讨CD40对调节性B细胞自身功能的影响以及调节性B细胞通过CD40信号途径对CD4+T细胞产生的影响。方法:流式细胞技术提取两种小鼠（野生型WT和CD40敲基因型CD40KO）的B 细胞及 CD19+CD5+CD1d+Bregs 与 CpG-ODN 及 CD40L+CpG-ODN 体外培养,检测培养前后B细胞中CD19+CD5+CD1d+Bregs的比例;CD19+CD5+CD1d+Bregs培养上清液中IL-10浓度;CD19+CD5+CD1d+Bregs（野生型和CD40敲基因型）分别于CD4+T细胞共培养,检测CD4+T细胞的增殖;CD4+CD25+Tregs 比例及上清液中IFN-γ的浓度。结果:1.CD40L+CpG-ODN 的 WT B 细胞培养体系中,CD19+CD5+CD1d+Bregs比例显著升高（P<0.01）,而CD40KO B细胞在培养前后CD19+CD5+CD1d+Bregs的含量无显著变化（P>0.05）。2.在加入CD40L+CpG-ODNCD40L的培养体系中,WTCD19+CD5+CD1d+Bregs 较 CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs 增殖明显（P<0.01）;上清液中IL-10的含量显著增高（P<0.01）。3.与CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs组比较,WTCD19+CD5+CD1d+Bregs 能抑制 CD4+T 细胞增殖（P<0.01）;并抑制了 IFN-γ分泌量（P<0.01）;同时能诱导 CD4+CD25+Tregs 生成增多（P<0.01）。结论:CD40信号激活可以诱导调节性B细胞的产生与增殖,并以IL-10依赖的方式诱导CD4+CD25+Treg细胞的增多,抑制CD4+T细胞的增殖及IFN-γ的分泌。第四部分CD40调控调节性B细胞对结肠癌荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及相关机制的初步研究目的:探讨CD40信号对调节性B细胞调控作用能否对结肠癌荷瘤小鼠的肿瘤生长产生影响。方法:应用结肠癌MC38细胞建立C57BL/6小鼠肿瘤模型,一周后给予荷瘤小鼠尾静脉注射两组不同小鼠（WT和CD40KO）的CD19+CD5+CD1d+Bregs,继续饲养2周后处死小鼠,取出肿瘤测量大小,计算体积。处死小鼠时留取脾脏,将其剪碎、研磨、过滤,制备成脾单个核细胞的悬液,应用流式细胞仪检测两组CD4+CD25+Tregs占CD4+T细胞的百分比进行不同组间比较。留取小鼠腹主动脉血,离心取血清,采用ELISA双抗体夹心法测定小鼠血清IL-10、IFN-γ水平。结果:1.WTCD19+CD5+CD1d+Bregs 组肿瘤体积（129.70±48.17 mm3）显著大于CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs组肿瘤体积（61.60±37.27 mm3）及空白对照组肿瘤体积（41.30±12.51mm3）（P<0.05）,而 CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs 组与空白对照组肿瘤体积无显著差异（P>0.05）。2.WTCD19+CD5+CD1d+Bregs组脾脏CD4+CD25+Tregs/CD4+T（8.72±0.57%）显著高于 CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs 组（5.20±0.15%）及空白对照组（4.94±0.22%）（P<0.01）,而 CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs组与空白对照组脾脏CD4+CD25+Tregs/CD4+T无显著差异（P>0.05）。3.WTCD19+CD5+CD1d+Bregs 组血清 IL-10 浓度（75.16±8.04pg/ml）显著高于CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs 组（53.80±3.82pg/ml）及空白对照组（49.66±3.63pg/ml）（P<0.01）,而CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs组与空白对照组体内IL-10浓度无显著差异（P>0.05）。而 WTCD19+CD5+CD1d+Bregs 组血清 IFN-γ浓度（67.16.80±8.42pg/ml）显著低于 CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs 组（82.40±6.85pg/ml）及空白对照组（85.58±5.45pg/ml）（P<0.01）,而 CD40KOCD19+CD5+CD1d+Bregs 组与空白对照组血清 IFN-y浓度无显著差异（P>0.05）。结论:激活调节性B细胞的CD40信号有利于结肠癌荷瘤小鼠的肿瘤生长提示调节性B细胞可能打破了机体的抗肿瘤免疫,其中涉及了调节性B细胞与T细胞的相互作用以及相关因子IL-10、IFN-γ的分泌异常。