背景目前,肺癌是全世界最高发恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率位居恶性肿瘤之首。据统计,在2012年新发肺癌病例为180万（占所有癌症的12.9%）,其中160万人死亡（占所有癌症死亡率的19.4%）。几十年前,肺癌已然成为世界上最常见的癌症:1980年估计有66万新病例,而在2012年上升到180万。值得注意的是,这些新病例中的58%病例发生在欠发达地区,而我国的肺癌病例形式也日趋严峻。非小细胞肺癌（NSCLC）占所有肺癌病例的85%,腺癌是其最常见的组织学亚型,占所有肺癌病例的近40%。在使用靶向治疗和免疫疗法之前,晚期肺癌患者的预后较差。其中,铂类双联化疗是所有无法治愈的局部晚期或转移性NSCLC患者的标准治疗,其有效率为19%,总生存期为7.9个月。有针对性的治疗已经获得显著有效的结果。最近研究表明,c-Src在NSCLC当中高度活化,特别是在腺癌中。同时许多文献报道,c-Src激酶活性水平与NSCLC中的肿瘤大小密切相关。此外,尼古丁和石棉在NSCLC细胞中的促有丝分裂作用可能涉及c-Src的激活。这些观察结果表明c-Src活性通常与多种NSCLC细胞的恶性进展相关。因为已知c-Src是上调受体酪氨酸激酶（包括HER2和EGFR）的重要介质,目前正在开发抑制c-Src活性的治疗策略。最近,在临床试验中已经研究了几种癌细胞中活化的c-Src抑制剂,不仅用于治疗肺癌,还用于治疗乳腺癌、结肠癌和前列腺癌。相关临床前研究表明,达沙替尼（BMS-354825）能够显著抑制NSCLC细胞生长减,同时通过下调下游信号的传导来影响NSCLC细胞迁移。以上研究表明,c-Src为NSCLC患者特定亚组治疗的有效靶点之一。c-Src家族属于蛋白酪氨酸激酶,其包含九种非受体型蛋白酪氨酸激酶,它们在一级结构和功能结构域中显示出高度的相似性。它们具有特定于致癌活化的共同位点,因此一起被称为c-Src家族。目前研究认为,激酶与细胞表面分子密切相关,并通过激活酪氨酸激酶活性介导细胞外信号。顺铂是一种治疗肺癌的常见化疗药物,但肿瘤患者经常对其产生耐药性,其中原因之一是c-Src的过度激活或过度表达。目的1.通过药物筛选,寻找能够有效抑制NSCLC的“老药”。2.评估Oxfendazole（奥芬达唑,OFD）发挥抗NSCLC活性的作用机制。3.在许多肿瘤的发生中,酪氨酸激酶c-Src家族蛋白是公认的原癌基因,可以作为抗肿瘤药物的潜在靶标。本研究旨在评估OFD是否能够作为新型c-Src抑制剂,并阐明其具体机制。4.评估OFD作为新型c-Src抑制剂与化疗药物联用对NSCLC细胞的杀伤作用。并结合上述结果,旨在发现单一药物或与其他抗肿瘤药物联合用药的抗NSCLC新疗法。方法1.利用CCK-8技术从FDA批准的药物库中筛选能够显著抑制NSCLC存活的药物。2.进一步利用CCK-8、流式细胞周期分析、蛋白免疫印迹法、裸鼠肿瘤异体移植模型检测OFD的抗NSCLC活性。3.利用蛋白免疫印迹法、分子对接、细胞因子刺激实验,检测OFD对NSCLC中c-Src活化的影响。并且通过构建c-Src过表达质粒,进一步检测c-Src是否影响OFD的抗NSCLC作用。4.通过与化疗药联合用药评估OFD在NSCLC治疗中的应用前景。结果1.通过药物筛选发现,OFD能够有效抑制NSCLC细胞存活。2.进一步实验发现,OFD在体内外都表现出良好的抗NSCLC活性。另外,流式细胞分析技术发现,OFD能使NSCLC细胞周期阻滞在G0/G1期,同时蛋白免疫印迹发现,OFD显著下调周期相关蛋白CDK4、CDK6和p-Rb的表达,并上调p21、p27的表达。另外,双荧光素酶报告基因实验表明,OFD能够抑制转录因子E2F1的转录活性。3.OFD显著抑制多种NSCLC细胞中c-Src的活化,并且呈现浓度梯度依赖性的抑制效果。同时,OFD对EGF及TGFβ所诱导的c-Src的活化同样具有显著的抑制效果。4.CCK-8检测发现,OFD显著抑制不同NSCLC细胞系的生长,而过表达c-Src能够部分抑制OFD的抗NSCLC作用。同时,分子对接也显示,OFD能够很好地对接到c-Src的活性口袋中。5.CCK-8和蛋白免疫印迹实验表明,OFD通过降低c-Src活化,能够协同增强化疗药对NSCLC的细胞毒性。结论OFD能够显著抑制NSCLC中c-Src的活化,可作为一种新型c-Src抑制剂。同时,OFD可通过抑制c-Src/CDK信号通路来抑制细胞周期进程,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而表现出良好的抗NSCLC活性。此外,OFD可通过降低c-Src活化来增强化疗药对NSCLC的细胞毒性,从而为临床NSCLC治疗提供新的研究策略。