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肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是最常见的恶性肿瘤之一。据最新统计,肝癌全球有78.2万新发病例,74.5万死亡病例。目前,HCC在临床上的治疗策略以手术切除、肝移植、放化疗和靶向基因治疗等手段为主。尽管在早期诊断和治疗方法方面随着分子机制研究的不断深入得到了长足发展,但HCC患者的长期存活率仍然偏低,其主要的原因是由于HCC的高复发率和高转移率,从而导致患者的预后差、低存活率。因此,阐明HCC的分子调控机制,挖掘其潜在的治疗靶标在临床治疗上具有深远的意义。随着基因测序技术的不断发展,在针对许多人类恶性肿瘤初期诊断和发病机制的研究中发现了多种长链非编码RNAs（long-chain non-coding RNA,lncRNA）的表达处于失调状态,lncRNA作为一类非蛋白质编码RNA转录产物,是人类癌症发展的重要调节因子,尤其在肝癌、胃癌等恶性肿瘤中作用活跃。与此同时,研究已表明lncRNA可以直接或间接调控肿瘤癌基因的表达水平,而且lncRNA作为HCC的生物标志物已经应用于HCC患者临床治疗的预后、诊断,甚至预测治疗结果等诸多方面。可见lncRNA在调节HCC细胞生物学功能上表现出关键性的调控作用,已经发现在增殖、侵袭、凋亡、转移和耐药能力等方面显示出巨大的研究和应用潜力。在本研究中 lncRNA FEZF1-AS1（FEZ family zinc finger 1 antisense RNA 1）是一种具有巨大研究潜力的lncRNA,其长度为2653个核苷酸,位于染色体7q31.32。lncRNA FEZF1-AS1的调控作用在结肠直肠癌、胃癌和肺腺癌等多种恶性肿瘤中表现出巨大的研究潜力,但其在HCC中的功能和调控机制仍不清楚。因此,深入研究lncRNA FEZF1-AS1在HCC细胞中的调控机制具有潜在的预防和治疗意义。研究目的:本研究旨在阐明lncRNA FEZF1-AS1在HCC组织和细胞系中的表达模式和表达水平,通过进行体内外实验探讨lncRNA FEZF1-AS1在HCC进展期间的作用靶点和生物学功能,进一步阐明lncRNA FEZF1-AS1与Wnt/β-catenin信号通路在调控肿瘤细胞增殖、侵袭、凋亡和转移的作用机制。研究方法:1、采用二代测序技术对筛选HCC组织和周边非肿瘤组织中的显著差异基因,并进行测序数据分析,筛选出表达具有显著性差异的基因,分析与HCC相关的差异表达的信号通路,利用RT-PCR技术验证lncRNA FEZF1-AS1在人肝癌组织和周边非肿瘤组织中表达水平的差异。2、回顾性分析lncRNA FEZF1-AS1表达水平与HCC患者整体生存及临床病理特征之间的相关性,阐明lncRNA FEZF1-AS1表达水平差异在HCC患者中的临床治疗意义。3、通过利用CCK-8、流式细胞术、Transwell小室和细胞划痕实验检测HCC细胞侵袭和迁移实验等体外功能检测技术,分析lncRNA FEZF1-AS1的表达水平变化对HCC细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和肿瘤功能的影响。4、通过荧光素酶实验寻找lncRNA FEZF1-AS1的作用靶点,利用PCR反应及免疫印迹等方法进一步研究Wnt/β-catenin信号通路与lncRNA FEZF1-AS1对肿瘤细胞功能的影响。5、通过构建小鼠HCC肿瘤模型,进一步研究下调表达lncRNAFEZF1-AS1上调表达β-catenin后对HCC实体瘤生物学功能的影响。研究结果:1、通过二代测序研究我们发现在HCC组织及周边非肿瘤组织中存在多个差异性表达lncRNA,其中lncRNA FEZF1-AS1具有较为显著的差异性表达,并证实lncRNA FEZF1-AS1在HCC患者组织中上调表达。2、回顾性分析显示lncRNAFEZF1-AS1的上调表达与HCC的疾病晚期TNM分级、淋巴组织转移和肿瘤细胞转移的发生率高、预后存在正相关。3、lncRNA FEZF1-AS1的上调表达能够促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭的过程,并可以抑制肿瘤细胞的凋亡,下调其表达结果相反。4、蛋白免疫印迹和荧光素酶等实验显示lncRNA FEZF1-AS1与miR-107特异性结合,并通过调控HCC细胞内Wnt/β-catenin信号通路的表达水平,导致相关信号蛋白在胞浆中的表达水平改变,加速肿瘤细胞的增殖。5、lncRNA FEZF1-AS1处于下调表达时,反向调节Wnt/β-catenin信号通路表达来抑制HCC细胞生长,促进其凋亡。并且在动物成瘤模型中也证实了 lncRNA FEZF1-AS1的下调表达能够对肿瘤生长起抑制作用。结论:本研究表明lncRNA FEZF1-AS1在HCC组织中表达上调,并影响肿瘤细胞的转移及预后,上调表达lncRNA FEZF1-AS1能够正向调节Wnt/β-catenin信号通路表达来实现对肿瘤的生物学功能的调控,其可作为肿瘤的促进因子来发挥调节作用,表明Wnt/β-catenin信号通路和lncRNA FEZF1-AS1可作为HCC新的预后生物标志物和治疗靶点,具有临床治疗和研究意义。