光慈姑多糖的提取纯化、理化性质及体外抗氧化活性研究

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光慈姑为百合科药用植物老鸦瓣Tulipa edulis(Miq.)Baker去除绒毛后的干燥鳞茎,光慈姑在临床上广泛用于咽喉癌、淋巴瘤、乳腺癌、通风等疾病的治疗,市场需求日益增大。目前光慈姑有效成分尚不明确,化学成分及活性、药理学等方面的研究较少。多糖作为光慈姑主要成分之一,含量丰富。研究光慈姑多糖的提取优化、纯化工艺、理化性质及其生物活性,对光慈姑品质评价及其开发利用具有重要意义。本文研究了光慈姑多糖的提取优化及纯化工艺,并测定分析了其理化性质及体外抗氧化活性。研究结果和结论如下:通过单因素试验和Box-Behnken中心组合试验设计,考察在超声提取的条件下温度、液固比及时间对光慈姑多糖提取率的影响,并对光慈姑多糖提取工艺条件进行优化。结果表明:对光慈姑多糖提取率的影响次序为:超声时间>提取温度>液固比。光慈姑多糖最佳提取工艺参数是:提取温度70℃,液固比30:1(mL/g),超声时间170 min。在此条件下,光慈姑粗多糖得率预测值为13.80%。对光慈姑粗多糖TEP进行初步纯化,探索出一套简单可行的纯化工艺流程,即水提醇沉得到的粗多糖经淀粉酶去淀粉、4%三氯乙酸脱蛋白、HPD-100大孔树脂静态吸附去除色素、透析法脱盐等一系列纯化过程得到光慈姑精制多糖TEP1。采用Molish试剂反应、碘-碘化钾反应等颜色反应,对光慈姑多糖进行定性分析,结果表明光慈姑粗多糖TEP经初步纯化后不含淀粉、蛋白质等杂质。对光慈姑精制多糖TEP1进行理化性质研究,结果表明光慈姑精制多糖TEP1呈白色粉末状或絮状,无味,具吸湿性,水溶液透明;1%多糖水溶液pH为5.05;易溶于水、稀酸、稀碱、稀盐等溶液,难溶于高浓度的乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂;成分检测结果显示,TEP1不仅含有中性多糖,且含有酸性多糖,同时含有极少量糖蛋白。其中中性糖含量为43.14%,糖醛酸含量为29.75%,蛋白质含量为0.27%;红外光谱检测结果显示TEP1在4000 cm-1~500 cm-1呈典型的多糖特征吸收峰,且存在糖醛酸特征结构,糖链构型为吡喃糖。用Vc作阳性对照组,通过探讨光慈姑精制多糖TEP1对DPPH ·自由基、对ROS自由基(包括O2-·自由基和·OH自由基)的清除作用及清除金属离子的能力(包括总还原力及对金属离子的螯合能力)评价其体外抗氧化活性。结果表明光慈姑精制多糖TEP1具有一定的抗氧化作用,且在不同抗氧化体系中,其抗氧化活性表现差异显著。其中对·OH自由基清除作用较明显,且在一定的浓度范围内,其清除能力显著高于对照Vc;TEP1对金属离子也表现出较强的螯合能力,且螯合力随浓度的增大而显著增强。但TEP1的总还原力较弱,对DPPH较和O2-·的清除力也不高。
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