目的：探索中药对雄性动物生殖毒性的试验方法 方法：体外试验：建立体外SD大鼠原代睾丸支持细胞／生精细胞的混合培养和支持细胞的培养系统，选择从临床已发现有男性生殖毒性的昆明山海棠分离出来的两种主要有效成分——雷公藤甲素（Triptoliede，TL）和雷公藤次碱（Wilforine，WR）作为受试物，应用MTT法检测不同浓度的TL和WR对培养细胞增殖的影响，应用免疫细胞化学技术检测两种受试物对培养细胞广谱钙粘素（pan-cadherin）和卵泡刺激素受体（fshr）表达的影响，验证体外试验方法。 体内试验：选择临床已发现有男性生殖毒性的骨风宁（主要成份为昆明山海棠）给予SD大鼠经口灌胃3个月，进行睾丸切片的HE和PAS染色以及免疫组织化学技术等病理学方法研究其雄性生殖毒性。 结果：TL对体外混合培养细胞的最低有毒浓度为10 μg／L，IC₅₀为1.22 mg／L；TL对培养支持细胞的最低有毒浓度为10³ μg／L，IC₅₀为28.15 mg／L；并均呈剂量依赖性。WR对培养支持细胞的最低有毒浓度为10⁵ μg／L，IC₅₀=139.26 mg／L；WR对混合培养细胞无毒性作用。 在TL 0.1、1和10 μg／L浓度水平时混合培养细胞pan-cadherin的表达上调；TL各组与溶剂对照组相比对培养支持细胞中pan-cadherin和fshr的表达无统计学差异；WR各组与溶剂对照组相比对混合培养细胞和培养支持细胞中的pan-cadherin和fshr的表达无统计学差异。 骨风宁给药组SD大鼠睾丸生精细胞减少或消失，可见多核巨细胞，受损的睾丸中生精上皮处于Ⅰ～Ⅲ期的曲细精管比例增多。给药期末给药组动物睾丸组织中pan-cadherin的表达与对照组无统计学差异，给药期末骨风宁高剂量组动物的睾丸组织中fshr的表达降低。恢复期末骨风宁中、高剂量组动物睾丸组织中pan-cadherin的表达分别升高和降低，恢复期末给药组动物睾丸组织中fshr的表达与对照组无统计学差异。 结论：中药的雄性生殖毒性研究可以联合应用体外试验和体内试验。体外试验可以用来进行生殖毒物的初步筛选；体内动物实验提供毒性证据。探讨毒性作用机