【摘 要】
：
目的通过构建Twist基因启动子区荧光素酶报告基因表达质粒,将构建成功的质粒瞬时转染非小细胞肺癌细胞株A549和人胚肾细胞株HEK293,用不同浓度的苯并(a)芘处理后,检测荧光素
论文部分内容阅读
目的通过构建Twist基因启动子区荧光素酶报告基因表达质粒,将构建成功的质粒瞬时转染非小细胞肺癌细胞株A549和人胚肾细胞株HEK293,用不同浓度的苯并(a)芘处理后,检测荧光素酶活性,探讨苯并(a)芘诱导Twist基因启动子区驱动的报告基因表达影响,为苯并(a)芘暴露诱导Twist基因表达促进肺癌转移的分子机制理解提供实验依据。方法1.利用分子克隆技术根据NCBI(https://www.ncbi.nim.nih.gov/)网站最新公布的Twist(human)基因启动子区序列,设计带有KpnI和XhoI酶切位点的引物,通过PCR技术扩增长度为451 bp的启动子区序列,与KpnI和XhoI两种核酸限制性内切酶处理的荧光素酶报告基因载体pGL3-basic连接,构建重组质粒,命名为pGL3-TWIST-promoter-luc。通过菌液PCR和重组质粒双酶切及测序鉴定pGL3-TWIST-promoter-luc重组质粒是否构建成功。2.利用瞬时转染技术,将构建成功的pGL3-TWIST-promoter-luc重组质粒和内参质粒分别瞬时转染至非小细胞肺癌细胞株A549和人胚肾细胞株HEK293。3.细胞转染24 h后,用不同浓度的苯并(a)芘(0 μM、2 μM和4 μM)处理细胞48 h,溶剂对照组加入二甲基亚砜(DMSO)(0.1%,V/V),每个剂量组设立3个平行孔,用双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性。结果1.以HEK293细胞基因组DNA为模板,经PCR反应成功扩增Twist基因启动子区片段长度为451 bp。2.通过菌液PCR和重组质粒双酶切和测序鉴定证实成功构建Twist基因启动子区荧光素酶pGL3-TWIST-promoter-luc重组质粒。3.双荧光素酶实验结果显示在非小细胞肺癌细胞株A549和人胚肾细胞株HEK293,苯并(a)芘暴露组荧光素酶活性明显高于对照组(P<0.05),并随苯并(a)芘浓度的升高荧光素酶活性升高。结论成功构建了Twist 基因启动子区的报告基因表达质粒(pGL3-TWIST-promoter-luc),在非小细胞肺癌A549和人胚肾HEK293细胞苯并(a)芘暴露可以诱导Twist基因启动子区驱动的报告基因表达。
其他文献
目的多发性骨髓瘤是血液系统中常见的恶性肿瘤,其发病率近年来逐年增高。当合并肾损伤时,多数患者表现为肾小球滤过率下降,从而易导致该部分患者首诊于肾内科,被误诊为肾脏疾
针对于目前国内旋压机床只能对一些简单的曲线刀路进行处理,尤其对于多道次复杂曲线的旋轮轨迹,目前还没有合适的自动编程系统能够高效、精准的处理。因此,本文基于AutoCAD平台开发了一套操作简单,适用范围广泛的通用性数控旋压机床自动编程系统。本文先介绍了旋压技术的历史发展,国内外学者对旋压技术的研究成果,目前异形件旋压中涉及到的问题,以及自动编程系统的现状。从多道次任意曲线旋轮轨迹的自动编程总体角度出
背景:瞬时受体电位(transient receptor potential channel,TRP)受体通道蛋白是一类包含七个亚家族的非电压依赖、非选择性阳离子通道,在呼吸系统中广泛表达。其中瞬时受体电
目的:探讨右美托咪定对老年患者罗哌卡因腰硬联合麻醉下膝关节置换术术后康复的影响。方法:选取2018年6月-2019年6月于我院行全膝关节置换术的80例老年患者,按随机数字表法分
我们日常生活中经常见到的交通工具如飞机、高速列车等均存在较大的摩擦阻力,克服这些摩擦阻力需要消耗很多能量。高速行驶的物体表面存在较大摩擦阻力的原因是在其表面形成
磺胺类药物(SAs)是一类用于系统预防和治疗人类细菌感染的抗生素。相对较少的磺胺类药物被批准用于食品生产的哺乳动物。与其他类别的抗菌药物相比,磺胺类在兽医学中的应用很高,它们被用于治疗或预防急性全身疾病或局部感染,并作为饲料和饮用水的添加剂或作为宫内注射剂用于动物中。但是由于使用不当,导致磺胺类药物在诸如牛奶或肉类等许多动物源性食品中积累,经过食物链最终进入人体,危害人体健康。磺胺甲恶唑(SMX)
现代煤化工是煤炭清洁化,精细化利用的重要方式,其有利于缓解我国资源对外依赖程度,维护我国能源安全,但是水是制约现代煤化工发展的重要因素。煤化工废水具有水量大,水质复杂的特点,含有酚类,多环芳烃,长链烷烃,杂环类等有机物,对活性污泥存在一定的抑制作用。实验使用陶瓷平板膜生物反应器处理煤化工废水,结合MBR高污泥浓度以及陶瓷平板膜高通量、高强度的特点,考察反应器对煤化工废水的处理效果、膜污染情况及相关
随着工业的发展以及射流技术的研究的深入,在各种工业领域中,射流技术被越来越广泛的运用,如提高内燃机的燃烧效率、控制化学反应速率、汽车减阻、噪声减噪、增加飞机火箭等
目的探究老年抑郁与轻度认知障碍的关系,并探究抑郁的严重程度与轻度认知障碍的发生是否存在剂量反应关系,探讨抑郁对认知下降的影响。研究对象和方法本研究采用来自欧洲健康
近年来,通过C-H活化构建C(sp2)-P键的研究引起了人们广泛的研究兴趣,不仅仅是因为芳基膦酸酯及杂环芳烃膦酸酯类化合物在有机合成和药物化学的重要性,也因为其衍生物在金属催化剂的合成中被广泛用作配体。含膦的吲哚衍生物代表了一类特殊的含磷氮杂环,其不仅是药物分子的重要骨架,而且也广泛的应用于有机材料中,以及是有机合成中的重要配体和中间体。因此,这类化合物的合成一直受到研究者的关注。含苯并咪唑片段的