论文部分内容阅读
背景:瞬时受体电位(transient receptor potential channel,TRP)受体通道蛋白是一类包含七个亚家族的非电压依赖、非选择性阳离子通道,在呼吸系统中广泛表达。其中瞬时受体电位香草素受体4型通道蛋白(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)是一种机械敏感的离子通道,参与五羟色胺(serotonin,5-HT)诱导的肺血管收缩,且在暴露于慢性低氧环境的小鼠的肺动脉收缩中起作用。环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acid,EET)是TRPV4的内源性激动剂,已知可调节血管收缩张力;细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)酶参与EET的生成;在慢性缺氧条件下,EET及CYP的水平均显著增加。我们假设经CYP产生的EET激活TRPV4,从而参与调控慢性缺氧环境下5-HT诱导的肺动脉收缩。方法:分别选取年龄匹配的雄性野生型(wild type,WT)和trpv4基因敲除(trpv4-/-)C57BL/6J小鼠。将慢性缺氧组小鼠暴露于10%O2环境3-4周,诱导慢性缺氧性肺高压;对照组小鼠被安置在相同环境中,暴露于正常氧浓度。充分暴露后,将小鼠处死,肺动脉分离、切段、去内皮制成肺动脉环并置于克氏液中,将肺动脉环固定在血管张力测定仪上,记录等长收缩张力。经过60分钟平衡后,将肺动脉环暴露于60mM KCl溶液以达到最大收缩,记录相应收缩张力;将肺动脉环暴露于5-HT中,记录相应收缩张力。分别加入特异性TRPV4抑制剂HC-067047、CYP酶抑制剂MS-PPOH,记录相应收缩张力。经过标准化处理,最大收缩张力(Emax)以60mM KCl诱导的最大收缩张力为100%计算。结果:在常氧野生型小鼠组中,用MS-PPOH抑制CYP酶后,Emax和半最大效应浓度(EC50)无显著变化;用HC-067047抑制TRPV4后,Emax无显著变化,剂量反应曲线显著右移(-logEC50 7.425±0.0884 vs.7.780±0.1134,P<0.05)。在去内皮处理的野生型慢性缺氧肺动脉中,5-HT诱导的肺动脉收缩较常氧组明显增强(Emax 178.1±9.767%vs.114.7±2.266%,P<0.05);HC-067047 组的收缩张力较对照组显著降低(P<0.05);MS-PPOH组5-HT诱导的肺动脉段收缩受抑制,其抑制程度与HC-067047处理后的抑制程度相仿(P>0.05)。慢性缺氧trpv4-/-小鼠与HC-067047处理后的慢性缺氧野生型小鼠Emax无显著差异(153.4±6.207%vs.142.5±4.603%);MS-PPOH对trpv4-/-小鼠的Emax和EC50均无影响。进一步评估5-HT诱导产生的最大收缩张力增加的百分比,发现:慢性缺氧能使5-HT介导的最大收缩张力增加约55%;经HC-067047和MS-PPOH处理后,野生型慢性缺氧组小鼠收缩反应的增加百分比显著减少,而Emax(HC-067047:24.24±4.013%vs.MS-PPOH:35.16±3.336%,P>0.05)和-Log EC50(HC-067047:7.436±0.1673 vs.MS-PPOH:7.311±0.07788,P>0.05)在 HC-067047 组和 MS-PPOH 组小鼠中无明显差异。结论:CYP-EET-TRPV4途径可能部分参与促进慢性缺氧环境中5-HT介导的肺动脉收缩。TRPV4可能是慢性缺氧性肺高压的潜在治疗靶点。