硒是人和动物所必需的微量元素之一，具有调节生长，提高生产性能、繁殖性能、机体免疫力，抗氧化、抗自由基、颉颃有毒元素以及减少糖尿病、心血管疾病、肿瘤疾病的发生等多种重要的生物学功能。　　 我国存在广泛的缺硒区，奶牛日粮中补硒已经是奶牛养殖业采取的常规措施。研究发现生物源性的有机硒比无机硒毒性小，生物利用率高，而且对环境的污染小。益生菌具有改善动物胃肠道微生物区系平衡，促进动物健康和生长的作用。富硒益生菌(Selenium-enriched probiotics，SP)制剂是本研究室根据微生物转化的原理，应用益生菌将无机硒转化为有机硒的一种新型有机硒源制剂，能同时发挥有机硒和益生菌的双重生物学功能。有研究表明日粮添加SP能提高奶牛对Se的利用率、降低乳中细胞数、具有提高奶产量的趋势以及提高羔羊的生产性能，但是SP对奶牛乳品质的影响及其对反刍动物的作用机理还不清楚。本文研究了日粮添加SP对奶牛乳品质的影响，特别是对乳中脂肪酸组成的影响。并且，以山羊为模型，研究了SP对瘤胃代谢、瘤胃液和血浆中脂肪酸含量的影响及添加SP后瘤胃细菌区系的变化，探索了其作用的相关机理，为SP在奶牛和山羊生产上的广泛应用提供理论依据。　　 试验1.日粮添加富硒益生菌对奶牛血硒、乳硒、乳成分和乳中脂肪酸组成的影响　　 本试验通过给奶牛日粮中添加不同来源的硒(Se)，比较了不同硒源对血Se、乳Se、乳成分和乳中脂肪酸组成的影响。将32头经产荷斯坦奶牛随机分成4个试验组。对照组饲喂基础日粮；亚硒酸钠(SS)组、富硒酵母组(SY)和富硒益生菌组(SP)除了饲喂基础日粮外，每天还分别添加5 mg不同来源的Se。试验从产前30 d开始，到产后90 d结束。于试验的第0、60、75、90d，经尾静脉采集血液样品；于试验的第60、75、90 d，采集奶样。试验结果表明，日粮添加不同Se源，对乳产量、乳糖、乳脂、乳蛋白以及血清GPx3的活性影响均不显著(P>0.05)；但能显著提高全血Se(P<0.01)、乳Se浓度(P<0.01)、GPx1的活性(P<0.05)以及乳中多饱和脂肪酸的百分比(P<0.05)，特别是C18:2cis-9，cis-12的百分比(P<0.05)，而且有降低饱和脂肪酸的趋势(P=0.11)。与SS组相比，日粮添加SP和SY均能显著提高全血Se(P<0.05)、乳Se(P<0.05)和乳中多不饱和脂肪酸的百分比(P<0.05)。　　 试验2.日粮添加复合益生菌对瘤胃体外发酵的影响　　 以饲喂苜蓿干草为基础日粮的成年山羊作为瘤胃液供体，利用人工模拟瘤胃发酵的方法，研究了不同剂量的复合益生菌(0、1、1.5、2和2.5 mL·L-1)对瘤胃微生物发酵的影响。每个120 mL的发酵瓶中含450 mg发酵底物(精料150 mg，苜蓿干草300 mg)，15 mL瘤胃液和45 mL的培养基。发酵结束后，分别采集瘤胃液，测定瘤胃pH值和挥发性脂肪酸(VFA)。结果表明，与对照组相比，日粮添加复合益生菌对瘤胃体外发酵pH值、丙酸浓度、丁酸浓度和总挥发性脂肪酸浓度(TVFA)影响不显著(P>0.05)；但是，显著提高了乙酸浓度(P<0.05)，而且二者之间具有剂量效应；乙丙比也有提高的趋势(P=0.08)。结果显示，日粮添加复合益生菌升高瘤胃体外发酵的乙酸浓度，而且有升高乙丙比的趋势。　　 试验3.日粮添加不同硒源和硒水平对瘤胃体外发酵的影响　　 以饲喂苜蓿干草为基础日粮的成年山羊作为瘤胃液供体，利用人工模拟瘤胃发酵的方法，研究了2种硒源(亚硒酸钠和富硒益生菌)和不同硒水平(0.25、0.5和1 mg·kg-1)对瘤胃微生物发酵的影响。每个120 mL的发酵瓶中含450 mg发酵底物(精料150mg，苜蓿干草300 mg)，15 mL瘤胃液和45 mL的培养基。发酵结束后，分别采集瘤胃液，测定瘤胃pH值、挥发性脂肪酸(VFA)、微生物蛋白(MCP)和氨态氮(NH3-N)。结果表明，硒源对体外发酵瘤胃的pH值、MCP和NH3-N具有显著影响(P<0.05)，而且有影响丁酸浓度的趋势(P=0.08)。与亚硒酸钠相比，日粮添加富硒益生菌能显著升高MCP浓度(P<0.05)和降低NH3-N(P<0.05)和丁酸浓度(P<0.05)。　　 试验4.日粮添加富硒益生菌对山羊瘤胃代谢的影响　　 以8头装有永久性瘘管的山羊为试验动物，采用4×4拉丁方设计，进行4期试验，每期15 d。在日粮中分别添加0(对照)、8(LSP)、16(MSP)、32(HSP)mL·d-1的富硒益生菌(SP)，在每期的第14 d采集各组山羊饲后的瘤胃液进行瘤胃发酵参数的测定。结果表明，日粮添加SP对山羊瘤胃pH、乙酸、总挥发性脂肪酸(TVFA)和微生物蛋白(MCP)浓度有显著影响(P<0.05)，而且有影响氨态氮(NH3-N)浓度的趋势(P=0.08)。与对照组相比，在发酵2h，MSP和HSP组的MCP显著升高(P<0.05)；在发酵4h，MSP和HSP组的pH和TVFA显著升高(P<0.05)；在发酵6h，MSP组的pH和乙酸浓度显著升高(P<0.05)，HSP组的乙酸浓度升高(P<0.05)；在发酵8h，MSP和HSP组的pH显著升高(P<0.05)。结果显示，给山羊日粮中添加SP能够提高瘤胃pH，增加瘤胃乙酸浓度、TVFA浓度、MCP浓度，促进瘤胃微生物的发酵。　　 试验5.日粮添加富硒益生菌对山羊血液学指标和抗氧化能力的影响　　 以8头装有永久性瘘管的山羊为试验动物，采用4×4拉丁方设计，进行4期试验，每期15 d。在日粮中分别添加0(对照)、8(LSP)、16(MSP)、32(HSP)mL·d-1的液体富硒益生菌(SP)，在每期的第15 d饲喂前经颈静脉采血，测定血液学与生化指标及抗氧化能力。结果表明，日粮添加SP对血细胞(白细胞、淋巴细胞、单核细胞等)影响不显著(P>0.05)，但是，有升高红细胞的趋势(P=0.08)；日粮添加SP能显著升高血浆总蛋白(P<0.05)，全血Se浓度(P<0.05)，GPx1活性(P<0.05)，和降低MDA浓度(P<0.05)。结果显示，日粮添加SP能够增强山羊机体的抗氧化能力，而且有升高红细胞的趋势。　　 试验6.日粮添加富硒益生菌对山羊瘤胃液和血浆中脂肪酸含量的影响　　 以8头装有永久性瘘管的山羊为试验动物，采用4×4拉丁方设计，进行4期试验，每期15 d。在日粮中分别添加0(对照)、8(LSP)、16(MSP)、32(HSP)mL·d-1的液体富硒益生菌(SP)，在每期的第15 d饲喂前采血，采集饲后3h的瘤胃液分别测定脂肪酸和血浆甘油三酯浓度。结果表明，日粮添加SP能显著影响瘤胃液和血浆中的trans-11 C18:1含量(P<0.05)，而且具有影响瘤胃液α-C18:3含量的趋势(P=0.07)。与对照组相比，HSY组的甘油三酯浓度显著降低(P<0.05)。结果显示，日粮添加SP能显著升高瘤胃液和血液中trans-11 C18:1含量，而且，HSY组还具有降甘油三酯的作用。　　 试验7.日粮中添加富硒益生菌后山羊瘤胃细菌区系的变化　　 以3头装有永久性瘘管的山羊为试验动物，采用自身对照设计，正式试验前10 d为适应期，对照期和试验期各20 d。试验期经瘤胃瘘管给山羊添加富硒益生菌(SP)16 mL·d-1。分别采集对照期和试验期第20 d晨饲喂后3 h的瘤胃液，-20℃备测。提取添加前后瘤胃液的总DNA，利用细菌通用引物8F/1510R扩增16S rDNA的基因序列，分别构建2个16S rDNA基因文库；从每个文库中各随机挑取200个克隆，对阳性克隆用HhaⅠ酶进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析、聚类，取各RFLP类群中的代表克隆进行16S rDNA序列测定，构建系统发育树，研究细菌区系多态性的变化。结果发现，瘤胃中的优势菌群为噬纤维菌/屈绕杆菌/拟杆菌(CFB)、低(G+C)含量的革兰阳性菌(LGCGPB)和变形菌，而且60％以上细菌为未培养菌。给山羊添加SP能增加瘤胃微生物的多态性(30比35)，特别是LGCGPB的多态性(6比9)；添加SP后，瘤胃中纤维分解菌的多态性和克隆数增加。