中药复方芪白合剂及蛇床子素等六种中药单体对黑素细胞作用的研究

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【目的】应用体外培养的正常人黑素细胞模型和血清药理学的方法探讨芪白合剂对黑素细胞的作用以及阐述其治疗白癜风的可能机理;观察蛇床子素、补骨脂素、黄芪甲苷、芍药甙、薄荷醇、黄芩苷对黑素细胞的作用,进一步寻找治疗白癜风的中药单体;【方法】应用血清药理学方法对复方中药芪白合剂进行研究,中药芪白合剂给兔持续灌药后于末次给药30min,60min,120min,180min,300min采血,制备血清,加入体外培养正常人黑素细胞体系,应用MTT法和多巴氧化法等测定含药血清对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性以及黑素合成的影响;应用半定量RT-PCR方法测定含药血清对黑素细胞TYR、MITF mRNA表达的影响;本课题第二部分以8-MOP为阳性对照,培养液为空白对照,通过MTT法、流式细胞方法测定不同浓度蛇床子素、补骨脂素、黄芪甲苷、芍药甙、薄荷醇、黄芩苷等六种中药单体对黑素细胞增殖及细胞周期的影响,采用多巴氧化法、NAOH法测定黑素细胞内酪氨酸酶活性和黑素合成的变化,并进一步应用qRT-PCR和western-blot方法测定酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达和蛋白的变化;【结果】结果显示含药血清可以促进黑素细胞的增殖,上调酪氨酸酶的活性和黑素合成,尤以60min,120min时间点采血时含药血清作用最为明显;实验显示含药血清可以上调TYR、MITFmRNA基因表达;蛇床子素、补骨脂素、黄芪甲苷、芍药甙、薄荷醇、黄芩苷六种中药单体在高浓度(100μg/ml)时对细胞的生长产生抑制作用,在5-10μg/ml浓度时可以促进黑促细胞的增殖,通过流式细胞检测发现,黄芪甲苷、薄荷脑、黄芩苷、芍药甙可以使黑素细胞S期比率增加,与空白培养液组比较有明显差异(P<0.05);黄芩苷、芍药甙、蛇床子素、补骨脂素可以上调酪氨酸酶的活性,增加黑素细胞的黑素合成,与8-mop作用相似,黄芪甲苷和薄荷脑上调酪氨酸酶活性的作用不明显,与培养液组比较无明显差异(P>0.05):加入药物24h后,中药单体普遍可以上调TYR,TRP-1 mRNA表达,高于对照组,具有明显统计学差异(P<0.05),但均低于8-MOP;与8-MOP比较补骨脂素、蛇床子素、黄芪甲苷和黄芩苷可以促进黑素细胞TYR蛋白表达,TRP-1蛋白的表达量并未升高,反而有轻度下降;【结论】芪白合剂含药血清可以促进黑素细胞的生长,上调酪氨酸酶的活性和黑素合成,并可以通过上调TYR、MITFmRNA基因表达,推测其可能通过这一途径起到促进酪氨酸酶活性的作用,从而达到治疗白癜风的作用;六种中药单体可以促进黑素细胞增殖,其中黄芪甲苷和薄荷脑对黑素细胞增殖的促进作用最强,并可以增加黑素细胞S期的比率,但对酪氨酸酶的活性和黑素合成未显示明显促进作用;补骨脂素、蛇床子素、黄芩苷、芍药甙可以上调酪氨酸酶的活性和促进黑素合成,并可以促进黑素细胞TYR、TRP-1 mRNA基因表达和TYR蛋白表达,推测这些化合物可能通过此途径起到促进黑素合成的作用。
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