激活态雪旺细胞联合硫酸镁修复脊髓损伤的研究

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【目的】探讨激活态雪旺细胞(activated schwann cells,ASCs)联合硫酸镁(magnesium sulfate,MgSO4)在修复脊髓损伤中的作用,并评价该方法对脊髓损伤的疗效。【方法】通过结扎Wistar幼鼠双后肢隐神经从而激活雪旺细胞并进行体外分离、培养、纯化、传代获得大量细胞。Wistar大鼠48只以MASCIS IMPACTORMODEL-Ⅱ打击器制备脊髓胸10(T10)损伤模型。随机分为4组,每组12只:单纯DMEM对照组、MgSO4组、ASCs移植组和MgSO4联合ASCs移植组。术后每周每组随机选取8只大鼠进行肢体功能恢复情况的行为学评分(BBB评分)。12周后每组随机选择4只动物进行10%BDA神经顺行示踪皮质脊髓束(corticospinaltract,CST)标记,标记2周后(术后14周)处死动物,取出动物损伤段脊髓作5μm快速冰冻切片后,进行Cy3荧光染色;同时制备脊髓石蜡切片进行神经丝蛋白(Neurofilament protein 200,NF-200)和胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidic protein,GFAP)免疫荧光染色。各种免疫荧光染色数字图像结果经Volocity LE 32.6.1组织切片图像分析软件处理,以免疫阳性反应的面积比进行比较。采用方差分析(ANOVA)对实验结果进行统计学分析,比较各组的统计学差异。【结果】所有大鼠在脊髓损伤后均出现下肢截瘫。损伤后4周,各组BBB评分实验组较对照组功能恢复明显,各组之间差异具有统计学意义(ANOVA检验,P<0.05)。BDA顺行示踪与NF-200和GFAP免疫荧光染色显示联合移植组和雪旺细胞移植组较单纯组有较多的神经纤维穿过缺损部位,而空白对照组几乎未见再生神经纤维穿越,各组间差异有统计学意义(p<0.05)。【结论】ASCs联合MgSO4既可以防治脊髓继发性损伤,又能明显促进脊髓损伤后轴突再生和肢体功能恢复,较之单纯应用二者更能显著改善脊髓损伤后功能的恢复。
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