【摘 要】
:
重要工业生产菌株恶臭假单胞菌是革兰氏阴性菌,其细胞表层分布大量脂多糖分子,对细胞的生长和代谢调控起着重要作用;但这些脂多糖分子的精细结构目前未见报道。本论文利用生
论文部分内容阅读
重要工业生产菌株恶臭假单胞菌是革兰氏阴性菌,其细胞表层分布大量脂多糖分子,对细胞的生长和代谢调控起着重要作用;但这些脂多糖分子的精细结构目前未见报道。本论文利用生物化学、分析化学和分子生物学技术,对恶臭假单胞菌KT2442细胞表层类脂A分子结构多样性进行了研究,并鉴定了相关基因功能。主要研究结论如下:(1)从恶臭假单胞菌KT2442细胞膜中提取纯化脂质分子,并通过TLC、HPLC和ESI/MS/MS分析,确定了恶臭假单胞菌KT2442细胞膜中的磷脂组分和类脂A结构。磷脂中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、心磷脂的含量分别为79.9%、12.7%和7.4%;磷脂脂肪酸链组成主要为C16:1和C18:1。恶臭假单胞菌KT2442中至少存在六种不同的类脂A分子结构,脂肪酸链组成主要为C10和C12。(2)鉴定了KT2442染色体上的基因PP0737和PP3154均编码类脂A的脱酰基化酶,能够去除类脂A分子3位上的脂肪酸链,因而将这两个基因分别命名为pag L1和pag L2。首先通过在大肠杆菌W3110和HW001中进行异源表达,初步鉴定这两个基因均能编码脱酰基化酶;接着在KT2442中构建pag L1和pag L2的单敲除和双敲除突变株,进一步确定了这两个基因在KT2442中能够编码脱酰基化酶;最后在双敲除突变株中进行了这两个基因的回补表达,验证这两个基因都能编码脱酰基化酶。(3)系统研究了不同培养环境对pagL1和pagL2转录及类脂A脱酰基化的影响。将KT2442在不同温度、二甲苯浓度、锌离子浓度、镁离子浓度、p H条件下进行培养。pag L1的转录水平在高浓度锌离子和高浓度的镁离子条件下发生下调;pag L2的转录水平在高浓度二甲苯、高浓度锌离子、低浓度的镁离子条件下发生了上调;另外温度和锌离子主要影响了Pag L1和Pag L2的酶活。脱酰基化水平随着温度和二甲苯浓度的升高而升高,随着锌离子浓度和镁离子浓度的升高而降低。(4)系统研究了Pho P-Pho Q和ColR-ColS双组份调控系统在不同环境条件下对pagL1和pag L2的影响。将两个调控系统的敲除突变株在不同二甲苯浓度、锌离子浓度和镁离子浓度条件下进行培养。Pho P-Pho Q在高镁和低镁条件下均上调类脂A的脱酰基化水平;Col R-Col S在LB条件和高镁离子条件下轻微下调了脱酰基化水平;Col R-Col S在二甲苯存在时上调了脱酰基化酶的整体水平;在低镁离子条件下,Col R-Col S对于类脂A脱酰基化调控规律不定。(5)初步研究发现恶臭假单胞菌KT2442染色体上的基因PP2423和PP4570能编码类脂A的双加氧酶,该酶能够在2位次级脂肪酸链上添加一个3-OH,因而将这两个基因命名为lpx O1和lpx O2。PP1735能够编码类脂A的脂肪酸转移酶,能够在2’位上添加一条C12的次级脂肪酸链,因而将这个基因命名为lpx L2;初步鉴定PP0024能够编码类脂A的磷酸乙醇胺转移酶,能在1或者4’位的磷酸基团上添加磷酸乙醇胺,因而将这个基因命名为eptA。
其他文献
随着国有企业改革的不断深入,试点企业在公司治理、投资市场化以及授权放权等方面积累了大量的经验,然而,如何促进地方国有企业深化改革以及如何选择具体的路径还需进一步摸索。G公司作为地方中小型国有企业,抢抓改革机遇,主动探索适于本企业市场化发展的道路,在探索过程中,业务流程冗长、部门间工作重复、责任推诿现象频发,成为制约G公司自主改革的瓶颈。本文以G公司的业务流程再造为研究背景,在六西格玛管理和流程再造
吲哚-3-乙酸(indole 3-acetic acid, IAA)是植物体内重要的植物激素。植物样品中IAA的高效提取和精确测定对于研究其在植物生命活动的调节作用具有非常重要的意义。本文采用
植物染发剂具有天然、绿色、环保等优点而受到人们的青睐。然而,作为天然色素,植物染料容易受到环境因素如光、热和p H等影响从而限制了在化妆品中的应用。微胶囊技术具有保
伴随新时期城市建设技术水平突增、发展日新月异的新局面,高技术更加需要高情感的支撑平衡,作为城市文脉的重要汇集地——历史文化街区公共空间,面临文脉危机、情感失衡的严峻挑战:传统规划注重各类保护范围线的划定、高度控制等诸多刚性管控要求,但对于街区公共空间中体现出的历史价值、场所精神等文化精神内涵、空间与人的心理行为关系等方面缺乏足够重视与引导,因此,从文脉视角思考并重新审视历史文化街区公共空间尤为重要
Levan果聚糖是果聚糖中的一类,广泛存在于许多植物和微生物中,在化学、医疗、化妆品和食品等产业有很大的应用潜力。Levan果聚糖在植物中含量偏低,提取成本较高,微生物发酵产
小麦、水稻、玉米、大豆是我国最主要四大粮食作物,对于我国粮食安全起着至关重要的作用。在全球气候恶化的大背景下,维持四种作物的生产可持续发展,开展这几种作物的耐寒、
从2002年国内第一支私募证券投资基金的发行开始,私募证券投资基金的发行逐年增加。特别是随着我国股指期货、融资融券等金融创新业务和金融衍生工具的推出,之后的几年内私募
中国经济快速发展的同时,带来了生态环境、社会环境方面的问题,使得城市的可持续发展成为了社会关注的焦点,所以对城市在环境保护方面的情况进行评价,进而对城市的发展提供有用的建议。本文主要应用粗糙集与动态不确定因果图(DUCG)理论相结合的方法,将两者的理论互补,并应用于城市环境保护的评价中,取得了可靠的排名结果并给出了相应的建议。(1)从自然环境、经济环境、社会环境三个层面出发,对我国一线城市和新一线
商用展示柜是具有冷冻冷藏、保鲜、展示等功能的隔热柜体,我国商用展示柜的市场以立式冷藏展示柜为主,因其展示面积大、展示效果直观,所以主要用于各类饮料的存储销售。本文主要对风冷式立式冷藏展示柜进行研究,其具有价格高、耗电量大、噪音高的缺点,较高的噪音将严重影响人们的健康和生活质量,因此噪音问题越来越受到厂家和客户的关注。首先,对立式冷藏展示柜的结构和工作原理进行简要介绍,在噪声测试半消声室中运用HAN
基因治疗作为一种新型的疾病治疗手段,具有广阔的发展前景。然而缺乏安全、高效的基因载体仍是目前限制基因治疗发展的主要问题之一。病毒型载体虽具有较高的基因递送效率,但由于免疫原性、制备困难等局限性限制了其广泛应用。因此,非病毒基因载体被认为是促进基因治疗发展的希望所在。聚乙烯亚胺(PEI)是非病毒载体的杰出代表,具有较强的基因携带能力和优良的“质子海绵”效应。然而,PEI过量正电荷引起强烈细胞毒性,使