干扰素是一类具有抗病毒、抗增殖和免疫调节作用的细胞因子。通过DNA重组技术生产的α干扰素已经广泛用于治疗病毒性疾病和恶性肿瘤，但由于在体内的半衰期太短，需频繁注射，其临床应用受到限制，而聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)修饰技术为解决这一问题提供了可能。　　 蛋白质分子上连接聚乙二醇可以增加有效粒径，降低肾清除率，进而延长它的半衰期。然而，目前用传统技术获得的长效干扰素产品存在着修饰产物不均一、活性低、副反应大等问题。　　 本研究在前期获得高活性、低副反应的集成干扰素突变体的基础上，进一步通过体外突变将一个游离半胱氨酸引入适当位置，使PEG可定点连接到干扰素分子上，从而获得修饰位点单一的结合物。　　 首先通过序列分析，确定半胱氨酸引入位点，利用定点突变技术，构建集成干扰素半胱氨酸突变体分子，重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达，表达量占菌体总蛋白的30％，包涵体变复性处理后，经疏水、DEAE及S-100层析分离，目的蛋白纯度达95％以上。重组蛋白在适宜的条件下与马来酰亚胺PEG进行修饰反应，修饰产物经CM层析，分步洗脱后单修饰体纯度达98％，比活性高于5.0×106IU/ml。以上单修饰物经系统的质量研究及临床前初步药理毒理评价，PEG干扰素达到药用质量要求，大鼠体内半衰期延长11.7倍。　　 本研究为临床治疗提供了新的药物分子，也为蛋白质改造和PEG定点修饰提供新的方法和思路。通过此项技术建立起PEG修饰药物的技术平台，推动长效蛋白质药物的应用开发。