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葛根芩连汤由葛根、黄芩、黄连、甘草4味药组成，本方在方剂学中列入“解表清里之剂”。一般认为本方有解表清里之功，主治身热下利，胸脘烦热口中作渴，喘而汗出的病证。近年来国内外医学家通过实验研究证明葛根芩连汤具有解热、抗菌、抗病毒、解痉、抑制胃肠运动、抗缺氧、抗心律失常、增强机体免疫功能等药理作用，是临床上用于治疗菌痢、肠伤寒、急慢性胃肠炎、婴幼儿腹泻等疾病的常用方剂。近年来国内开发出了葛根芩连片，葛根芩连微丸以及葛根芩连口服液等剂型，本实验拟研制葛根芩连有效部位制剂，并制成分散片，使其在体内崩解迅速，分散较好，达到吸收完全迅速。本论文的研究目的包括对处方中各药材的有效部位进行提取精制，使其有效部位含量达50％以上，以及制剂成型工艺研究和该制剂的质量标准研究。本论文包括以下研究内容：1、方中各药有效部位提取精制工艺研究1．1葛根总黄酮提取精制工艺研究以葛根素为对照品，采用紫外分光光度法建立葛根总异黄酮含量测定方法。以乙醇回流提取制备得葛根粗提物，葛根总异黄酮含量约为36％，含量较低。根据异黄酮成分的性质，采用大孔树脂法精制该粗提物，使精制后的提取物总异黄酮平均含量为65％。优化后的精制方法：采用D101大孔树脂（树脂床体积为30ml），葛根粗提取物加蒸馏水制备上柱液（总黄酮含量为9.0mg／ml），吸附速率为2ml／min，最大上样量为60ml，采用80ml的70％乙醇以3ml／min的速度洗脱，收集洗脱液，减压除去溶剂，得浸膏，干燥，即得。测得该提取物中总异黄酮平均含量为65％，其中葛根素的总转移率为49.38％。1．2黄芩总黄酮提取精制工艺研究以黄芩苷为对照品，采用紫外分光光度法建立黄芩总黄酮的含量测定方法，采用煎煮法提取黄芩药材，合并提取所得煎液，浓缩，调溶液pH值至1—2，80℃保温，放至室温，离心分离沉淀，沉淀水洗至pH为5，60℃干燥，即得。以浸膏量和总黄酮含量为评价指标，采用正交设计评价精制工艺。优化结果：水煎液浓缩为原液的1／3，加盐酸调PH为1-2，80℃保温，保温2h，静置12h。按最佳提取精制工艺制备，所得提取物总黄酮平均含量85％，其中黄芩苷的总转移率为30.18％1．3黄连总生物碱提取精制工艺研究以盐酸小檗碱为对照品，采用紫外分光光度法建立总生物碱含量测定方法，采用乙醇回流提取法，以总生物碱含量为评价指标，采用正交设计评价提取工艺，最佳提取工艺条件：乙醇浓度为50％，乙醇8倍量，提取2次，每次2h。精制工艺采用盐析法，将提取工艺所得提取液浓缩至一定体积，加入NaCl至一定浓度，室温下静置，离心分离得沉淀，60℃干燥，即得。精制工艺以浸膏重和总生物碱含量为评价指标，采用正交设计评价精制工艺，最佳工艺为：黄连乙醇提取液减压回收溶剂，浓缩至原体积的1／6，加入NaCl使浓度达到5％，静置24h。按最佳提取精制工艺制备，所得提取物总生物碱含量为70％，其中小檗碱的总转移率为38.79％。1．4甘草提取精制工艺研究建立以香草醛硫酸显色法测定甘草总皂苷含量方法，甘草总皂苷含量测定方法检测限较低，测量方法比较复杂，而甘草酸为甘草总皂苷的主要成分，因此在提取精制工艺中以甘草酸含量代替甘草总皂苷含量为评价指标。提取工艺采用0.5％稀氨水回流提取，提取液过滤，合并滤液，浓缩至300ml，加稀盐酸调pH值至1，静置30min，离心20min（3000r／min），沉淀60℃烘干，即得。以浸膏重和甘草酸含量为评价指标，采用正交设计优选提取工艺，最佳工艺：8倍量稀氨水，回流提取3次，每次1.5h。根据甘草总皂苷成分的性质，采用大孔树脂法精制该粗提物，使精制后的提取物总皂苷平均含量为50％。优化后的精制方法：采用D101大孔树脂（树脂床体积为30ml），甘草粗提取物加蒸馏水制备上柱液（甘草酸含量为0.3mg／ml），吸附速率为1ml／min，最大上样量为40ml，采用140ml的50％乙醇以2ml／min的速度洗脱，收集洗脱液，减压除去溶剂，得浸膏，干燥，即得。测得该提取物中总皂苷平均含量为50％，其中甘草酸的总转移率为68.3％。2制剂成型工艺研究按照汤剂中的比例组成有效部位制剂，拟制备分散片，进行了成型工艺的相关研究。葛根素为葛根总异黄酮的主要有效成分，由于其口服吸收差，生物利用度低，因此进行了固体分散技术的尝试。以葛根素溶出度为评价指标，进行了以不同基质制备的葛根异黄酮固体分散体溶出度测定，采用威布尔分布法计算T50，Td，确定PEG6000为基质的葛根异黄酮分散体溶出速度快，性状好，适宜制备分散片，但由于服用量较大，最终放弃固体分散体制剂。成型工艺：将方中各味药的提取物粉末混合均匀，加入适当的辅料，以50％乙醇为粘合剂，制颗粒，60℃烘干，整粒，压片（0.5g／片，2片／次，3次／日），即得。采用崩解时间为评价指标，采用正交设计评价成型工艺，最佳工艺确定：填充剂微晶纤维素用量为药物的1倍，崩解剂选用交联PVP，用量为处方总量的20％，颗粒粒径40～60目。对新制剂进行崩解时间、分散均匀性和溶出度考察，均符合分散片项下要求；并与微丸进行了葛根素溶出度比较，初步确定分散片溶出速度比微丸快。3．制剂质量标准研究3．1制剂的定性研究对制剂中所含四味药材进行了TCL定性鉴别，采用对照品及对照药材对照，在供试品相应位置上有相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰，薄层色谱鉴别方法专属性强。3．2制剂中总有效部位含量测定方法研究根据待测量有效部位性质，对供试品以不同方法预处理，采用紫外分光光度法测定，方法学结果表明，三种方法具有可行性。制剂中总异黄酮含量27.8mg／片，总黄酮含量62.22m g／片，总生物碱含量27.8mg／片。3．3制剂中各有效成分含量测定方法研究采用HPLC建立四个有效成分含量测定方法，进行了方法学考察，结果表明精密度、重现性、稳定性均符合要求。制剂中葛根素含量12.54mg／片，黄芩苷含量30.39mg／片，小檗碱含量17.18mg／片，甘草酸含量4.45mg／片。